小鼠脾基質細胞處理方法及細胞說明書僅供參考,,具體操作還需要根據到貨時細胞密度,細胞生長狀態(tài)等具體情況,,酌情處理,。
一.小鼠脾基質細胞貼壁細胞
客戶接收到細胞,,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過的)培養(yǎng)瓶外部。
肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,,顯微鏡觀察細胞生長情況,,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張),。
顯微鏡觀察細胞,,當細胞融匯80%左右(可以傳代的情況下),細胞應該在37度培養(yǎng)箱預溫1-2h后再做處理,。如未達到細胞傳代密度,,培養(yǎng)瓶應預留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
嚴格無菌操作,,打開細胞培養(yǎng)瓶,。
將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管完,全吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞),。
用PBS2-3ml/次輕輕洗細胞表面,,加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細胞,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,,加入終止液終止,。
1000rpm,5min離心,重懸細胞,。換新的細胞培養(yǎng)瓶,,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
二.小鼠脾基質細胞懸浮細胞
1.接收到細胞,,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過的)培養(yǎng)瓶外部,。
2.肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
3.嚴格無菌操作,,打開細胞培養(yǎng)瓶,。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管完,全吸出(嚴禁直接傾倒),。
5.1000rpm,5min離心,,重懸細胞。換新的細胞培養(yǎng)瓶和新鮮培養(yǎng)基,,37℃,5%CO2培養(yǎng)
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