江蘇恒敏儀器冷凍干燥機主要部件分為干燥箱,、凝結器,、冷凍機組,、真空泵,、加熱/冷卻裝置等,。凍干機起源于19世紀20年代的真空冷凍干燥技術,,后真空凍干技術除了在醫(yī)藥上有著廣泛應用,,在生物制品,、食品,、血液制品、活性物質領域之外的領域也發(fā)揮了重要作用,。下面小編為大家介紹下微生物菌種的冷凍干燥保藏操作流程:
凍干機適用于大多數細菌,、放線菌、病毒,、噬菌體,、立克次體、霉菌和酵母等的真空冷凍干燥保藏,,但不適于霉菌的菌絲型,、菇類,、藻類和原蟲等。其操作流程如下:
1,、安瓿管準備
安瓿管材料以中性玻璃為宜,。清洗安瓿管時,先用2%鹽酸浸泡過夜,,自來水沖洗干凈后,,用蒸餾水浸泡至pH中性,干燥后,、貼上標簽,,標上菌號及時間,加入脫脂棉塞后,,121℃下高壓滅菌15-20分鐘,,備用。
2,、保護劑的選擇和準備
保護劑種類要根據微生物類別選擇,。配制保護劑時,應注意其濃度及pH值,,以及滅菌方法,。如血清,可用過濾滅菌,;牛奶要先脫脂,,用離心方法去除上層油脂,一般在100℃間歇煮沸2-3次,,每次10-30分鐘,,備用。
3,、凍干樣品的準備
在適宜的培養(yǎng)條件下將細胞培養(yǎng)至靜止期或成熟期,,進行純度檢查后(參見科技部自然科技資源平臺聯合管理辦公室文件《微生物菌種純度檢測技術規(guī)程》(試行)),與保護劑混合均勻,,分裝,。微生物培養(yǎng)物濃度以細胞或孢子不少于108-1010個/ml為宜(以大腸桿菌為例,為了取得每毫升1010個活細胞菌液2毫升-2.5毫升,,只需10毫升瓊脂斜面兩支),。采用較長的毛細滴管,直接滴入安瓿管底部,,注意不要濺污上部管壁,,每管分裝量約0.1-0.2毫升,若是球形安瓿管,,裝量為半個球部,。若是液體培養(yǎng)的微生物,,應離心去除培養(yǎng)基,然后將培養(yǎng)物與保護劑混勻,,再分裝于安瓿管中,。分裝安瓿管時間盡量要短,在1-2小時內分裝完畢并預凍,。分裝時應注意在無菌條件下操作,。
4,、預凍
一般預凍2小時以上,,溫度達到-20℃到-35℃左右。
5,、冷凍干燥
采用凍干機進行冷凍干燥,。將冷凍后的樣品安瓿管置于冷凍干燥機的干燥箱內,開始冷凍干燥,,時間一般為8-20小時,。
終止干燥時間應根據下列情況判斷:
安瓿管內凍干物呈酥塊狀或松散片狀;
真空度接近空載時的最高值,;
樣品溫度與管外溫度接近,;
選用1-2支對照管,其水份與菌懸液同量,,視為干燥完結,;
選用一個安瓿管,裝1-2%氯化鈷,,如變深蘭色,,可視為干燥完結;
冷凍干燥完畢后,,取出樣品安瓿管置于干燥器內,,備用。
6,、真空封口及真空檢驗
將安瓿管頸部用強火焰拉細,,然后采用真空泵抽真空,在真空條件下將安瓿管頸部加熱熔封,。熔封后的干燥管可采用高頻電火花真空測定儀測定真空度,。
7、保藏
安瓿管應低溫避光保藏,。
8,、質量檢查
冷凍干燥后抽取若干支安瓿管進行各項指標檢查,如存活率,、生產能力,、形態(tài)變異,、雜菌污染等。
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