實(shí)驗周期:4-6 weeks
建模方法:
主要試劑: 紅金龍香煙(湖北中煙工業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn),,烤煙型,,每支含焦油量9mg,、煙氣煙堿量0.7mg,、煙氣一氧化碳量12mg),,脂多糖(lipopolysaccharide,,LPS,美國Sigma公司),,TNF-alpha和IL-18 ELISA試劑盒cloud-clone公司),。
建模方式:SPF小鼠,適應(yīng)性飼養(yǎng)1周,,采用鼻腔滴入LPS加熏香煙的方法建立COPD小鼠動物模型分別于第1,、29經(jīng)鼻腔滴入LPS(30μg/6μL),第2-30天(除第29天)采取熏香煙法,,將小鼠放入自制的玻璃熏箱,,10支/次,,30min/次,,5d/周,共4周,。
模型評價
一般觀察:一般情況空白對照組小鼠無死亡,,毛發(fā)光澤,呼吸均勻,,活動正常,;模型對照組小鼠毛發(fā)無光澤,部分有脫毛現(xiàn)象,,躁動,,熏煙時喜扎堆,倦怠蜷縮,,汗出,,腹部脹大,呼吸急促,,出現(xiàn)點(diǎn)頭運(yùn)動,,甚者張口呼吸明顯。
小鼠肺功能檢測看小鼠氣道阻力,、動態(tài)肺順應(yīng)性,、最大呼氣流量、吸氣時間、呼氣時間,、
組織病理學(xué)
肺組織形態(tài)學(xué)檢測:
腹腔麻醉小鼠后,,開胸暴露胸腔:取左側(cè)肺葉固定于10%甲醛溶液24h,常規(guī)脫水石蠟包埋,,切片行HE染色,,光鏡下觀察。
空白對照組小鼠肺泡結(jié)構(gòu)清晰,,肺泡大小均勻,,氣道黏膜上皮結(jié)構(gòu)完整,纖毛排列整齊,;模型對照組小鼠部分肺泡壁塌陷,,肺泡不規(guī)則擴(kuò)大并相互融合,形成肺大泡,,肺間質(zhì)內(nèi)可見不同程度的炎性細(xì)胞浸潤,,支氣管黏膜上皮脫落,黏膜皺襞增多,,突入管腔,,纖毛黏縮,管腔變窄,,符合COPD病理改變,。
標(biāo)志因子水平
TNF alpha、Il-18檢測:
最后一次煙熏完后24小時內(nèi)處死,,按0.05mL/10g)腹腔麻醉小鼠,,將小鼠腹主動脈取血法取血1mL,室溫下放置2h后,,2 000r/min離心20min,,取血清,-20℃保存?zhèn)溆?。按ELISA試劑盒操作步驟說明檢測小鼠血清中TNFalpha,、
相關(guān)產(chǎn)品
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