熒光顯微鏡用于研究化學物質在細胞中的吸收、運輸,、分布和定位。被測物體產生熒光的方式有兩種:自發(fā)熒光,,紫外線照射后直接發(fā)出熒光稱為二次熒光,,被觀察物經(jīng)熒光染料處理后,經(jīng)紫外光照射后才能發(fā)出熒光。細胞中的一些物質,,如葉綠素,,受到紫外線照射后會產生自發(fā)熒光。其他物質雖然本身沒有熒光,,但用熒光染料或熒光抗體染色后,,可以發(fā)出二次熒光。
熒光顯微鏡采用發(fā)光效率高的點光源,,發(fā)射一定波長的光(紫外光365nm或紫藍光420nm)作為激發(fā)光,,激發(fā)標本中的熒光物質發(fā)出各種顏色的熒光,然后通過物鏡和目鏡的放大進行觀察,。在這樣強的對比背景下,,即使熒光微弱,也容易識別,,靈敏度高,,主要用于研究細胞結構功能和化學成分。
熒光顯微鏡可分為兩種類型:透射顯微鏡和下落顯微鏡,。前者是原始的,,后者是的。兩種熒光顯微鏡的基本構造相似,,主要區(qū)別如下:透射激發(fā)光通過標本,,整個標本產生熒光,然后進入物鏡,,放大倍數(shù)越高,,熒光越弱;入射的激發(fā)光投射到樣品表面,,樣品表面產生熒光,,然后熒光進入物鏡。放大倍數(shù)越高,,熒光越強,,適合高倍觀察。
熒光顯微鏡的主要部件有汞燈光源,、激發(fā)濾板,、分色鏡(脫落式)、壓制濾板,、暗場聚光器(透射式)等,。此外,由于汞燈發(fā)熱嚴重,,大部分都裝有吸熱過濾器,。有些熒光顯微鏡也有相位差物鏡和環(huán)形光闌,,所以可以進行相位差觀察。而熒光顯微鏡采用倒置框架,,還有倒置顯微鏡等等,。
此外,上述所有顯微鏡都可以通過安裝CCD組裝成數(shù)字顯微鏡,,將顯微鏡看到的物理圖像轉換成數(shù)模圖像,,并使其在計算機上成像。因此,,我們可以從傳統(tǒng)的普通雙目觀察到顯示器上的再現(xiàn)來研究微觀領域,,從而提高工作效率。
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