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雙光束分光光度計(jì)經(jīng)單色器分光后經(jīng)反射鏡分解為強(qiáng)度相等的兩束光,，一束通過參比池，一束通過樣品池,。光度計(jì)能自動(dòng)比較兩束光的強(qiáng)度，此比值即為試樣的透射比,，經(jīng)對(duì)數(shù)變換將它轉(zhuǎn)換成吸光度并作為波長的函數(shù)記錄下來,。
雙光束分光光度計(jì)一般都能自動(dòng)記錄吸收光譜曲線。由于兩束光同時(shí)分別通過參比池和樣品池,，還能自動(dòng)消除光源強(qiáng)度變化所引起的誤差,。
雙波長分光光度計(jì)由同一光源發(fā)出的光被分成兩束，分別經(jīng)過兩個(gè)單色器,，得到兩束不同波長1和2的單色光,；利用切光器使兩束光以一定的頻率交替照射同一吸收池，然后經(jīng)過光電倍增管和電子控制系統(tǒng),，最后由顯示器顯示出兩個(gè)波長處的吸光度差值,。對(duì)于多組分混合物,、混濁試樣（如生物組織液）分析，以及存在背景干擾或共存組分吸收干擾的情況下,，利用雙波長分光光度法,，往往能提高方法的靈敏度和選擇性。利用雙波長分光光度計(jì),，能獲得導(dǎo)數(shù)光譜。
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