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雙光束分光光度計經(jīng)單色器分光后經(jīng)反射鏡分解為強度相等的兩束光,，一束通過參比池,，一束通過樣品池,。光度計能自動比較兩束光的強度，此比值即為試樣的透射比,，經(jīng)對數(shù)變換將它轉換成吸光度并作為波長的函數(shù)記錄下來。
雙光束分光光度計一般都能自動記錄吸收光譜曲線。由于兩束光同時分別通過參比池和樣品池,，還能自動消除光源強度變化所引起的誤差。
雙波長分光光度計由同一光源發(fā)出的光被分成兩束,，分別經(jīng)過兩個單色器,，得到兩束不同波長1和2的單色光；利用切光器使兩束光以一定的頻率交替照射同一吸收池,，然后經(jīng)過光電倍增管和電子控制系統(tǒng),，最后由顯示器顯示出兩個波長處的吸光度差值。對于多組分混合物,、混濁試樣（如生物組織液）分析,，以及存在背景干擾或共存組分吸收干擾的情況下,，利用雙波長分光光度法，往往能提高方法的靈敏度和選擇性,。利用雙波長分光光度計,，能獲得導數(shù)光譜。
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