熒光顯微鏡是利用特定波長的激發(fā)光照射被檢物體產(chǎn)生熒光進(jìn)行鏡檢的顯微光學(xué)觀測技術(shù)，是醫(yī)院科研,、病理,、檢驗(yàn)等部門常用的醫(yī)用光學(xué)儀器之一,。有些物質(zhì)受紫外線照射后可發(fā)熒光,，另有一些物質(zhì)需要用熒光染料或熒光抗體染色后,，經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光,，可以觀察到普通顯微鏡看不到的細(xì)節(jié)，大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室都有配備高質(zhì)量或者常規(guī)的顯微成像系統(tǒng),，但是調(diào)整熒光,，校正難度較高，因此需要了解熒光顯微鏡激發(fā)熒光的方式,。

按光的波長范圍分為UV激發(fā)法(使用紫外線照明法)和BV激發(fā)法(使用藍(lán)紫光)兩種,。

UV激發(fā)是用短于400nm紫外光進(jìn)行激發(fā)。該法不存在可見的激發(fā)光,，所以被觀察的熒光呈現(xiàn)該染料固有的熒光,，容易判別標(biāo)本上的特異熒光和背景組織的自身熒光。

BV激發(fā)是以404nm,、434nm為中心的由紫外至藍(lán)光進(jìn)行激發(fā),。適合使用藍(lán)光照射標(biāo)本，用藍(lán)光作為激發(fā)光,，熒光色素的吸收效率較高,，可得到較明亮的圖像。

BV激發(fā)時(shí)要注意以下2點(diǎn)：

①熒光顯微鏡的截止濾光片要使用可*阻斷藍(lán)光并可充分通過所需綠,、黃熒光的濾光片,；

②500nm以下的熒光無法看到，而500nm以上會(huì)使整個(gè)圖像顯黃色,。

因此,，熒光顯微鏡的照明可根據(jù)聚光器的構(gòu)造和激發(fā)光的波長按以下三點(diǎn)考慮。

①從熒光像的反差要求來看,，UV激發(fā)暗場聚光器照明,。
②以像的亮度來考慮，BV激發(fā)濾光片暗場觀察效率很高,。

③UV激發(fā)濾光片暗場觀察和BV激發(fā)暗場聚光器照明的特性,，可看作介于這兩種照明方法之間，但前者濾光片暗場的性質(zhì)較強(qiáng),，顯示圖像較明亮,，反差小,；后者因保留暗場光路的性質(zhì),，故顯示圖像較暗，而反差有所改善,。當(dāng)實(shí)際使用熒光顯微鏡時(shí),，應(yīng)采用合適標(biāo)本要求的照明法進(jìn)行觀察,。

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