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哪些因素會影響分離純化的結(jié)構(gòu)產(chǎn)生變化
在進(jìn)行菌種鑒定時(shí),，所用的微生物一般均要求為純的培養(yǎng)物。得到純培養(yǎng)的過程稱為分離純化.蛋白的分離純化常見方法,，離子交換,、分子篩,、疏水層析、親和層析等,，
在分離純化過程中多種外部因素都會導(dǎo)致抗原發(fā)生結(jié)構(gòu)變化,。
1. 溫度
由于蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性，找不到一個(gè)能描述溫度和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)功能之間關(guān)系的一般性機(jī)理,。但一般來說,，溫度越高，蛋白質(zhì)越不穩(wěn)定,。在分離純化過程中如果溫度過高,，長時(shí)間的純化過程可能導(dǎo)致抗原的降解，因此某些純化過程往往在低溫條件下進(jìn)行,。但溫度也并不是越低越好,，溫度會影響分離純化的效果。例如在疏水作用層析中,，溫度的降低可能導(dǎo)致抗原與填料的結(jié)合能力減弱,，發(fā)生穿透。此外,，低溫環(huán)境控制同樣帶來能耗的增加,。
2. pH值
溶液pH決定了蛋白質(zhì)的電荷性，因此會影響靜電作用,。靜電作用一方面會影響疫苗抗原自身的穩(wěn)定性：首先,，當(dāng)pH遠(yuǎn)離蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)時(shí)，隨著溶液酸性或堿性的增強(qiáng),，帶電荷的基團(tuán)數(shù)目增多,，折疊態(tài)上的電荷密度高于去折疊態(tài)，使得蛋白質(zhì)折疊態(tài)不穩(wěn)定,；其次,，
電荷同樣會增強(qiáng)蛋白質(zhì)分子間的靜電作用。例如病毒及病毒樣顆粒(VLPs)疫苗,，當(dāng)顆粒有強(qiáng)電荷性時(shí),，蛋白質(zhì)分子間的排斥作用有利于穩(wěn)定蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)，但由于病毒及VLPs是由許多亞基組成的,，數(shù)量可達(dá)上百,，且可能是由幾種不同的結(jié)構(gòu)蛋白組成,，亞基之間的靜電排斥可能造成顆粒的組裝結(jié)構(gòu)的不穩(wěn)定甚至解聚。另一方面,，靜電作用也會影響與純化過程中界面的相互作用。
3. 鹽
鹽對蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的影響比較復(fù)雜,。根據(jù)鹽的類型和濃度,、離子作用的性質(zhì)、蛋白質(zhì)中的帶電殘基,，鹽對蛋白質(zhì)可能起到穩(wěn)定,、破壞穩(wěn)定或者無任何影響等效果。鹽對蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的凈作用是鹽與蛋白質(zhì)直接作用以及對蛋白質(zhì)分子間作用影響的綜合結(jié)果,。由于pH影響蛋白質(zhì)的電荷類型,、總量及分布，因此鹽的作用還可能受pH的影響,。由此可見,，鹽的種類及濃度對疫苗抗原穩(wěn)定性的影響需要系統(tǒng)的考察。
4.振動和剪切
振動產(chǎn)生疏水的空氣/水界面可以導(dǎo)致蛋白質(zhì)分子在界面處的富集,，進(jìn)而發(fā)生變性,，使得暴露在空氣中的疏水殘基大化，并且還會引起蛋白質(zhì)的聚集,。剪切也可以暴露蛋白質(zhì)的疏水區(qū)域,，引起蛋白質(zhì)的聚集。在切向流超濾過程中,，溶液以一定流速流過膜表面,，流速越高，濃度極化的程度越小,，但是剪切力增加,。
5.界面
在分離純化過程中，固液界面上的吸附既是實(shí)現(xiàn)疫苗抗原純化的一個(gè)重要作用,，也是導(dǎo)致其變性的關(guān)鍵因素之一,。
在膜過濾過程中，超濾膜的材質(zhì)一般為纖維素,、聚砜,、聚偏氟乙烯等有機(jī)聚合物膜。這些膜的表面具有較強(qiáng)的疏水性,，蛋白質(zhì)很容易吸附在這些膜的表面上,。目前，商品化膜的表面都經(jīng)過修飾,，從而具有較好的親水性,，使得蛋白質(zhì)在膜上的吸附大大降低,，但是不能*避免蛋白質(zhì)在膜表面的疏水性吸附。另外,，膜的表面一般都帶有少量的負(fù)電荷,，由于靜電相互作用，帶正電的物質(zhì)會吸附在膜表面,。一般來說,，吸附在膜表面的蛋白質(zhì)容易發(fā)生變性，導(dǎo)致其生物活性發(fā)生變化,。
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