外泌體是包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡,，是細(xì)胞間信號(hào)傳輸?shù)妮d體,。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體，它們廣泛存在于血液,、唾液,、尿液、腦脊液和乳汁等體液中,，參與細(xì)胞間通訊,。近年來(lái)，外泌體的研究熱度持續(xù)攀升,，在2019年國(guó)家自然科學(xué)基金獲批項(xiàng)目中,，外泌體研究相關(guān)項(xiàng)目的總數(shù)突破500個(gè)，立項(xiàng)的總金額突破2億元,。但由于外泌體的尺寸（30~200 nm）,，常規(guī)的光學(xué)顯微鏡無(wú)法對(duì)其進(jìn)行成像分析，因此很少有技術(shù)能夠?qū)蝹€(gè)外泌體進(jìn)行物理表征和蛋白分型,。

美國(guó)NanoView Biosciences公司推出了全自動(dòng)外泌體熒光檢測(cè)分析系統(tǒng)ExoView系統(tǒng),，采用了SPIRS成像技術(shù)，只需要少量樣品即可一次完成外泌體計(jì)數(shù),、粒徑,、蛋白表達(dá)、蛋白共定位,、亞群分布的分析,。全自動(dòng)外泌體熒光檢測(cè)分析系統(tǒng)ExoView于2018年被推出后,，便引起了外泌體領(lǐng)域科研工作者的廣泛關(guān)注，目前已近100多個(gè)實(shí)驗(yàn)室采用該技術(shù),，發(fā)表文獻(xiàn)超過(guò)150篇,。進(jìn)入2022年，使用ExoView發(fā)表的論文出現(xiàn)井噴性增長(zhǎng),，短短數(shù)月已經(jīng)發(fā)表了近50篇,。本文選取了三篇在高水平期刊《Journal of   Extracellular Vesicle》（JEV）發(fā)表的比較有代表性的文章，來(lái)說(shuō)明ExoView在血樣本,、光誘導(dǎo),、心功能不全等研究領(lǐng)域的具體應(yīng)用。

四跨膜蛋白區(qū)分人血清和血漿中不同外泌體亞群-血漿中血小板外泌體的貢獻(xiàn)

早期研究證明從血液中分離外泌體的能力對(duì)于將外泌體開發(fā)為疾病的生物標(biāo)志物至關(guān)重要,，尤其是從血漿和血清中分離外泌體,，但很少有研究系統(tǒng)地比較這些來(lái)源的外泌體類型。Nasibeh Karimi等^[1]對(duì)確定血漿和血清中不同外泌體亞群的存在進(jìn)行了研究,。研究人員采集健康受試者血液,，分別用   K2E EDTA 采血管和 ACD-A采血管收集血漿，同時(shí)用血清凝塊激活劑管收集血清,，然后利用ExoView,、Western blot、ELISA 和質(zhì)譜等技術(shù)分析分離出的外泌體亞群,。結(jié)果表明人類血液中含有多個(gè)攜帶不同四跨膜蛋白的外泌體亞群,，使用不同的抗凝劑和離心方法，會(huì)影響外泌體亞群的分析,。

其中，研究人員使用ExoView對(duì)從血漿（EDTA）,、血清以及人肥大細(xì)胞系分離的外泌體進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示在血漿和血清的樣本中,，血小板蛋白CD41a抗體捕獲較多的是CD9+外泌體。與血清相比,，血漿中的CD9+外泌體更多，并且是從血小板釋放的（圖1 a,b,c），然而血清中的CD63+/CD41a+外泌體的數(shù)量高于血漿（EDTA）（圖1 m,n）,，這與之前的磁珠ELISA法的結(jié)果保持一致,。另外，在血漿,、血清樣本中,，被CD81抗體捕獲的外泌體的CD63+比例較低,，而CD9+比例較高（圖1 a,b,d,e,g,h）,，進(jìn)一步驗(yàn)證了早先的研究結(jié)果,，但是在人類肥大細(xì)胞系的樣本中，研究人員沒有觀察到這種差異（圖1 c,f,i,l）,。另一方面,，粒徑分析的結(jié)果顯示CD41a和CD9抗體捕獲的外泌體的粒徑相對(duì)較小，表明捕獲的外泌體是單外泌體,，而不是外泌體聚合物（圖1 o）,。

圖1 ExoView檢測(cè)從血漿,、血清,、人肥大細(xì)胞系分離的外泌體的數(shù)量、共定位和粒徑

光誘導(dǎo)免疫功能外泌體的高效產(chǎn)生

基于外泌體的治療方法和疫苗正在不斷興起,，然而基于臨床應(yīng)用劑量規(guī)模的研發(fā)始終是一個(gè)巨大的瓶頸,。為了克服這樣的障礙，Shaobo Ruan^[2]等開發(fā)了一種簡(jiǎn)單直接的方法,，通過(guò)利用近紫外LED燈（365 nm）的光感應(yīng)來(lái)促進(jìn)樹突狀細(xì)胞分泌外泌體 (DEV),。體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示，近紫外波長(zhǎng)不會(huì)損害細(xì)胞生長(zhǎng),，使DEV生產(chǎn)率提高了13倍以上,，同時(shí)讓DEV保持了良好的生物相容性和高度免疫性，使其成為理想的治療平臺(tái)。

其中,，研究人員使用ExoView對(duì)DEV的免疫性標(biāo)記物進(jìn)行檢測(cè),，把樣品組分為未處理的成熟樹突狀細(xì)胞來(lái)源的外泌體（mDEVs）、未處理的未成熟樹突狀細(xì)胞來(lái)源的外泌體（imDEVs）,、近紫外光照射的成熟樹突狀細(xì)胞來(lái)源的外泌體（UV-mDEVs）,、近紫外光照射的未成熟樹突狀細(xì)胞來(lái)源的外泌體（UV-imDEVs）。結(jié)果顯示在所有的分組中,，CD9抗體捕獲的外泌體數(shù)量始終比CD81抗體捕獲高4倍多,，這表明大多數(shù)DEV具有CD9表達(dá)，但可能不具有CD81表達(dá)（圖2 b,c,d),。CD63是外泌體中常見的結(jié)構(gòu)和功能蛋白,，這使得CD63+外泌體數(shù)量遠(yuǎn)高于MHC-I+、MHC-II+,、CD86+,。以CD63作為內(nèi)部參考，研究人員進(jìn)行了兩次平行實(shí)驗(yàn)以評(píng)估MHC-I/MHC-II與CD86的表達(dá)水平(圖2 c,d),。使用歸一化方法計(jì)算總捕獲DEV的生物標(biāo)記物的相對(duì)百分比,，結(jié)果表明mDEVs的MHC-I、MHC-II和CD86表達(dá)略高于imDEVs的表達(dá)（圖2 g,h）,。該結(jié)果與早先研究結(jié)果一致,，即mDEVs具有更強(qiáng)的免疫反應(yīng)誘導(dǎo)性。此外,，CD63/MHC-I/CD86,、CD63/MHC-II/CD86、MHC-I/CD86,、MHC-II/CD86或CD63/CD86的共表達(dá)在不同的 DEV條件下以及有或沒有進(jìn)行光處理沒有明顯變化,，盡管單獨(dú)的MHC-I或MHC-II在光處理后表現(xiàn)出輕微的減少（圖2 e,f），這證明光誘導(dǎo)對(duì)DEV的免疫標(biāo)記表達(dá)幾乎沒有影響,。在 DEV上保留必要的免疫標(biāo)志物對(duì)于免疫反應(yīng)至關(guān)重要,。

圖2 ExoView檢測(cè)mDEVs、imDEVs,、UV-mDEVs,、UV-imDEVs的免疫性標(biāo)記物的數(shù)量、共定位以及進(jìn)行熒光成像

含miR-421的外泌體與空氣污染（PM2.5）誘導(dǎo)心功能不全的發(fā)生機(jī)制相關(guān)

大氣細(xì)顆粒物（PM2.5,，空氣動(dòng)力學(xué)直徑≤2.5μm）是空氣污染的主要原因,。越來(lái)越多的證據(jù)表明，大氣PM2.5濃度的升高與總死亡率呈正相關(guān),，尤其是心血管疾病和呼吸系統(tǒng)疾病的死亡率,。 PM2.5急性/亞急性暴露對(duì)人體的危害不容忽視,，但是對(duì)于呼吸系統(tǒng)亞急性暴露于PM2.5所誘發(fā)心臟功能不全的分子機(jī)制尚不明確。上海大學(xué)王紅云[3]等在大氣污染相關(guān)的心血管疾病研究方面取得新進(jìn)展,，揭示了大氣PM2.5亞急性暴露引發(fā)心功能不全的新的分子機(jī)制：大氣PM2.5亞急性暴露在肺損傷后促進(jìn)外泌體釋放其攜帶的miR-421,，通過(guò)抑制ACE2導(dǎo)致 PM2.5誘導(dǎo)的心功能不全。

其中,，研究人員使用ExoView對(duì)從暴露于PM2.5的細(xì)胞上清液提取的外泌體以及對(duì)照組進(jìn)行檢測(cè),。結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比,，PM2.5組的外泌體數(shù)量顯著比對(duì)照組多（圖3 a）,。另外，粒徑的結(jié)果顯示了兩組外泌體的粒徑大小接近（圖3 d）,。多色熒光成像圖表明,，與對(duì)照組相比，PM2.5暴露增加了 CD63/CD81/CD9 共定位外泌體的數(shù)量（圖     3 c）,。這些數(shù)據(jù)證明了PM2.5 暴露可顯著增加CD63+,、CD81+和CD9 +外泌體。

圖3 ExoView檢測(cè)從暴露于PM2.5的細(xì)胞上清液提取的外泌體和對(duì)照組外泌體的計(jì)數(shù),、粒徑以及進(jìn)行熒光成像

在上述三篇文章中,，科學(xué)家借助美國(guó)NanoView Biosciences公司研發(fā)的全自動(dòng)外泌體熒光檢測(cè)分析系統(tǒng)ExoView，直接檢測(cè)樣本中的外泌體,，無(wú)需純化,，操作簡(jiǎn)單。一次結(jié)果直接輸出外泌體粒徑,，數(shù)目,，蛋白表型，不同亞群的含量,、多色熒光成像圖。三篇文章分別從血樣本,、光誘導(dǎo),、心功能不全等研究領(lǐng)域介紹了ExoView的無(wú)需純化，全面表征的特點(diǎn),，有力地證明ExoView是外泌體檢測(cè)的一大利器,。

為了更好的服務(wù)中國(guó)客戶；Quantum Design中國(guó)子公司在北京建立了專業(yè)的客戶服務(wù)中心,，正式推出專業(yè)的全面外泌體表征測(cè)試服務(wù),，您只需要很少量樣品即可獲得全面的外泌體表征數(shù)據(jù)：

服務(wù)推出至今，短短一年時(shí)間已經(jīng)助力多個(gè)單位客戶發(fā)表高水平文獻(xiàn)：

? 上海大學(xué)在《Journal of extracellular vesicles》發(fā)表文章,。

? 中國(guó)科學(xué)院深圳技術(shù)研究院在《Lab on a Chip》發(fā)表文章,。

?  北京天壇醫(yī)院、國(guó)家納米科學(xué)中心、北京航空航天大學(xué)在《Advanced Science》發(fā)表文章,。

?  同濟(jì)大學(xué)附屬上海市肺科醫(yī)院,、上海思路迪轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)在《Journal of Nanobiotechnology》發(fā)表文章。

? 山東千佛山醫(yī)院在《NANO LETTERS》發(fā)表文章

歡迎各位老師垂詢：010-85120280,。

參考文獻(xiàn)：

[1] Nasibeh Karimi, Razieh Dalirfardouei,   Tomás Dias, Jan Lötvall, Cecilia Lässer. (2022) Tetraspanins distinguish separate extracellular vesicle subpopulations in human serum and plasma –  Contributions of platelet extracellular vesicles in plasma samples. Journal of Extracellular Vesicles, https://doi.org/10.1002/jev2.12213.

[2] Shaobo Ruan, Nina Erwin, Mei He. (2022) Light-induced high-efficient cellular production of immune functional extracellular vesicles.  Journal of extracellular vesicles,   https://doi.org/10.1002/jev2.12194.

[3] Hongyun Wang, Tianhui Wang, Wei Rui, Jinxin Xie, Yuling Xie, Xiao Zhang, Longfei Guan, Guoping Li, Zhiyong Lei, Raymond M Schiffelers, Joost P G Sluijter, Junjie Xiao. (2022) Extracellular vesicles enclosed-miR-421 suppress air pollution (PM2.5)-induced cardiac dysfunction via ACE2 signaling. Journal of Extracellular Vesicles, https://doi.org/10.1002/jev2.12222.

相關(guān)產(chǎn)品：

1,、全自動(dòng)外泌體熒光檢測(cè)分析系統(tǒng)

http://sorrent.com.cn/st166724/product_35508627.html

2.ExoView外泌體全面表征試劑盒-NanoView

http://sorrent.com.cn/st166724/product_36142894.html