三.適用范圍:
適用于快速提取各種動植物細(xì)胞/組織基因組DNA,。
四.儲存條件:
1.結(jié)合液CB或者抑制物去除液IR低溫時可能出現(xiàn)析出和沉淀,,可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解,,恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用,。
2.為避免降低活性,、方便運(yùn)輸,,提供蛋白酶K為凍干粉狀,收到后,,可短暫離心后,,加入1ml滅菌水溶解,因?yàn)榉磸?fù)凍融可能會降低酶活性,,因此溶解后立即按照每次使用量(20微升)分裝凍存,,-20℃保存。
3.避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā),、氧化,、pH值變化,各溶液使用后應(yīng)及時蓋緊蓋子,。
五.注意事項(xiàng):
1.所有的離心步驟均在室溫完成,,使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13,000rpm的傳統(tǒng)臺式離心機(jī),如Eppendorf 5415C 或者類似離心機(jī),。
2.需要自備1XPBS(磷酸鹽緩沖液),和異丙醇,。
3.實(shí)驗(yàn)前將需要的水浴先預(yù)熱到70℃?zhèn)溆谩?/span>
4.結(jié)合液CB 和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物,操作時要戴乳膠手套,,避免沾染皮膚,,眼睛和衣服。若沾染皮膚,、眼睛時,,要用大量清水或者生理鹽水沖洗。
5.洗脫液EB不含有螯合劑EDTA,,不影響下游酶切,、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫,,但應(yīng)該確保批pH大于7.5,, pH過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA應(yīng)該保存在-20℃,。DNA如果需要長期保存,,可以用TE緩沖液洗脫(10mM Tris-HCl, 1mM EDTA,,pH 8.0),,但是EDTA可能影響下游酶切反應(yīng),使用時可以適當(dāng)稀釋,。
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