細(xì)菌工程菌胞內(nèi)表達(dá)主要分為兩種形式,，一種是在強(qiáng)啟動(dòng)子條件下的高效表達(dá)，由于蛋白的過(guò)度表達(dá),，使蛋白不能及時(shí)有效折疊而發(fā)生無(wú)規(guī)則卷曲,，以固體顆粒的形式堆積于胞間質(zhì)中,，這就是所說(shuō)的包涵體，另外一種是間質(zhì)內(nèi)的可溶性表達(dá),，即可以發(fā)生正常折疊,，具有生物活性。一般情況下,，細(xì)菌只要被正常破壁就可以通過(guò)離心的形式將包涵體和可溶性表達(dá)的蛋白分離開(kāi),。

超聲破碎的條件一般是300w，10s/10s,，20分鐘,，具體條件可根據(jù)自身情況而定。

超聲前菌體的準(zhǔn)備：菌液離心后,，先用PBS將菌沉淀洗2-3遍,，然后按原菌液體積的1/5-1/10加入裂解液重懸菌體，裂解液的成分：50mMTris-HCl, pH8.0, 2mM EDTA,，100mM NaCl,，加溶菌酶至100ug/ml,，0.1%Triton X-100。切記冰浴超聲,！

如何判斷是否超聲*：根據(jù)網(wǎng)友的經(jīng)驗(yàn),，一般有以下幾個(gè)方面：

1，外觀判斷：超聲前菌懸液是渾濁的,，超聲*后變的透明,、清澈。

2,，液體的粘滯性：超聲后菌液從槍頭滴下不粘連,。

3，高速離心：有用高速離心檢測(cè)超聲破碎程度的（一般用6,000 g 10 min, 比一般離心收集菌體的轉(zhuǎn)速高一點(diǎn)）,。 沉淀是未破碎或破碎不*的菌體,。

4，染色：破碎后的菌液涂片,，革蘭氏結(jié)晶紫溶液染色0.5分鐘,，鏡檢。

超聲后加入核酸酶消除核酸對(duì)蛋白的污染,。

一些需要注意的問(wèn)題：

1,，蛋白以包涵體形式表達(dá)，追求的是高破碎率,，要求細(xì)胞碎片很小,，而另一種蛋白是可溶形式表達(dá)，所以細(xì)胞碎片不能很小,，兩種情況要求不同但目的相同,，都是便于后期的固液分離。

2,，如果超聲時(shí)出現(xiàn)黑色沉淀,，說(shuō)明超聲功率太強(qiáng)。

3,，超聲時(shí)間太長(zhǎng),、功率太高對(duì)蛋白活性肯定有影響。

4,，盡量防止泡沫的產(chǎn)生,。