流動相，作為高效液相色譜法重要的組成部分,，它不僅僅是作為被分離物質(zhì)的運載體，它更是直接影響到分離的好壞,，測定的成功與否,。流動相的物理、化學(xué)性質(zhì)及其純度,，直接影響到色譜系統(tǒng)的穩(wěn)定性,、分離效率、分離速度,、檢測靈敏度,。

　　01在添加有機相后測量流動相的pH值

　　在水溶液中，pH值被校準(zhǔn)以提供正確的pH值——你需要確認(rèn)的緩沖液是水溶液,。如果你用添加了有機相的水溶液來測量pH值，pH值就會與有機相添加前的pH值不同,。

　　然而,，最重要的一點是要保持一致。如果你總是在添加有機相后測量pH值,，確保你在方法中說明了這一點，以便每個人都用同樣的方法,。它不會一定準(zhǔn)確，但至少會是一致的,。這可能比精確的pH值更重要。

　　02沒有使用緩沖液

　　緩沖液是用來控制pH值和抵抗pH值變化的,。方法的許多其他部分(例如樣品基質(zhì),、空氣中的二氧化碳,、流動相中水的來源)可以改變流動相的pH值，從而導(dǎo)致保留,、峰形和峰值響應(yīng)的變化,。甲酸等不屬于緩沖試劑。

　　03沒有在緩沖液正確的pH范圍內(nèi)使用

　　每個緩沖鹽有2個pH值單位范圍,，它提供了最佳的pH穩(wěn)定性。在緩沖范圍外面,，鹽對pH值的變化是無效的,。要么在正確的范圍內(nèi)使用緩沖區(qū),，要么選擇一個范圍覆蓋所需pH值的緩沖區(qū)。

　　04將緩沖液加入有機相中

　　將水的緩沖液混合到有機相中,，會導(dǎo)致緩沖液沉淀的高風(fēng)險——在許多情況下,，變化微小,，以至于可能不太明顯。常常是將有機物質(zhì)添加到水相,，這大大降低了緩沖沉淀的風(fēng)險,。

　　05使用泵的梯度混合從0%開始

　　現(xiàn)代泵在混合流動相和在線脫氣上非常有效，然而,，并不是每個使用你的方法的人都有一個高質(zhì)量的泵,。預(yù)混合你的A和B，混合成一個單一的溶液,，在A管路上*運行。

　　將950mL的水溶液與50mL的有機溶液混合,，然后過濾和脫氣,。這降低了HPLC之間的可變性，降低了系統(tǒng)中氣泡和沉降的風(fēng)險,。

　　注意，在泵上混合的95:5不會和在瓶中預(yù)拌的95:5相同的保留時間——你通常需要在預(yù)混合時添加更多的有機成分,。

　　06調(diào)節(jié)緩沖液的pH值

　　只使用你正在使用的緩沖鹽的酸或堿,。舉例來說，磷酸鈉緩沖液應(yīng)該僅用磷酸或氫氧化鈉來調(diào)節(jié),。

　　07緩沖液的全部信息

　　例如，將5g的磷酸鈉放入1000ml的水中

　　緩沖劑的類型(單鹽基,，二鹽基,，三鹽基)決定了它的pH緩沖范圍。

　　所需的質(zhì)量濃度決定了緩沖強度,。5g無水磷酸氫鈉和5g一水合磷酸氫鈉會有不同的緩沖強度,，并會影響到保留,。

　　08用有機相的填充管路

　　如果前一種方法在B管路中使用了緩沖液，而你的方法在B管路中使用了有機相,，那么緩沖液很有可能會在你的泵管路/泵頭中沉淀,。我在早期就這樣做了，并且造成了很大的傷害,。如果有懷疑——把它沖出來(用80:20水:有機相),。

　　09最后一滴流動相被使用掉

　　如果沒有足夠的流動相來完成運行——將有50%的可能性,，氣體將會在最后幾個樣品的中運行,。除了磨損你的泵和色譜柱走干的風(fēng)險,，流動相從表面蒸發(fā)，所以在瓶子頂部的流動相與大多數(shù)體積相比成分將會改變,。如果你使用瓶子里的最后少量的流動相,，頂部的這個部分恰好是貫穿柱子的東西。

　　10使用超聲儀對流動相進(jìn)行脫氣

　　這對確保你所有的緩沖鹽溶解都很好,，但這是最不有效的脫氣方法，它會迅速加熱流動相,，導(dǎo)致有機部分蒸發(fā),。節(jié)省你日后的問題——用5分鐘的時間來過濾你的流動相——它會在一個步驟中脫氣和過濾。

　　文章(文字)來源：分析圈,，封面圖片來源創(chuàng)客貼會員，儀器分析小編整理,。

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