時下細(xì)胞研究很火的科研技術(shù)當(dāng)屬單細(xì)胞測序,，但此技術(shù)對細(xì)胞懸浮液的總量以及活性都有一定的要求，因此制備高質(zhì)量的單細(xì)胞懸浮液成為實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵點(diǎn),。

單細(xì)胞測序涉及的細(xì)胞類型多種多樣，如腸、肺,、PBMC、胚胎,、神經(jīng),、乳腺、干細(xì)胞等,，而其中樣本的處理消化亦是重中之重,，樣本前處理與后續(xù)的分析結(jié)果有著莫大的關(guān)聯(lián),。如何在上機(jī)前得到非常優(yōu)質(zhì)的懸液呢？這里和大家分享一些制備優(yōu)質(zhì)單細(xì)胞懸液的小tips,。

1,、在樣本采集過程中，建議采用無菌樣品處理方式,，包括使用不含核酸酶的試劑和耗材,；

2、實(shí)體組織需要先處理,，傳統(tǒng)組織處理方法有機(jī)械法,，包括網(wǎng)搓法、研磨法,。機(jī)械法一般適用樣本類型為脾臟,、淋巴結(jié)、胸腺,；另外較溫和的方法有酶解法（使用胰蛋白酶類,、膠原酶、溶菌酶,、彈性蛋白酶以及一些商業(yè)化包裝的組合酶）,，適用樣本類型有肝臟、腎臟,、心臟,、肺臟、脊髓,、腦,、腸道、皮膚,、腫瘤等,。

3、如果您使用的是10x Genomics相關(guān)儀器和平臺,，可以從查看10x Genomics不同樣本單細(xì)胞懸液制備建議或者利用關(guān)鍵詞查詢與自己樣本類型相同的已發(fā)表的單細(xì)胞測序文獻(xiàn),。對于如何獲得高質(zhì)量的樣品，10X公司建議在單細(xì)胞懸液制備過程中,，細(xì)胞重懸的緩沖液選用無Ca2+,、Mg2+和EDTA的1× PBS，并用0.04% non-acetylated BSA清洗兩次（300rcf,，5min）,，選擇其他緩沖液或培養(yǎng)基可能會對結(jié)果產(chǎn)生不同程度的影響。

4,、細(xì)胞在處理過程受到外界環(huán)境影響,，其基因表達(dá)譜可能會出現(xiàn)一些變化,；有些細(xì)胞對環(huán)境極為敏感，可能會死亡裂解,，造成RNA降解從而造成檢測中的背景細(xì)胞升高,，進(jìn)而影響所獲得的數(shù)據(jù)質(zhì)量。實(shí)驗(yàn)過程中需要盡量避免細(xì)胞死亡,，不斷優(yōu)化細(xì)胞處理?xiàng)l件,，加快實(shí)驗(yàn)流程的進(jìn)度，減小對細(xì)胞的影響,。

5、單細(xì)胞懸液制備過程中出現(xiàn)的細(xì)胞團(tuán),、細(xì)胞碎片或纖維等雜質(zhì)會增加微流體芯片的堵塞風(fēng)險,。如果存在細(xì)胞碎片和大團(tuán)塊，請將樣品通過 40 µm Flowmi 細(xì)胞過濾器,，細(xì)胞懸液體積損失小,。

圖源：10x Genomics 的Protocol《 Fresh Frozen Human Peripheral Blood Mononuclear Cells for Single Cell RNA Sequencing》

圖源：《10x Genomics®Single Cell Protocols——Cell Preparation Guide》

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