本期我們將為您提供優(yōu)化 4D-Nucleofector™ X 單元的 Nucleofection™ 條件的指南，及有關該主題的常見問題。

Q：Nucleofector™ I 或 II 條件是否與 4D-Nucleofector™ X 單元兼容,？
4D-Nucleofector™ 系統(tǒng)基于升級后的 Nucleofector™ 技術，并具有以下主要改進：
· 兩種 Nucleofection™ 體系(20ul和100ul),，且實驗條件可以互相轉移
· Nucleocuvette™ 由導電聚合物而非鋁組成,，提高了細胞活力
· 簡化的 4D-Nucleofector™ 試劑
· 更廣泛的程序來微調您的優(yōu)化
由于這些差異，為 Nucleofector™ I 或 II 設備推薦的解決方案對 4D-Nucleofector™ 系統(tǒng)無效,。然而,，在 4D-Nucleofector™ X 單元上運行優(yōu)化是一個潛在改善 Nucleofection™ 結果的好機會。

Q：可以優(yōu)化哪些參數(shù),？
· 在 Nucleofection™ 優(yōu)化中,，最重要的參數(shù)是 Nucleofector™ 試劑和程序。

Q：我應該使用什么底物進行優(yōu)化,？
· 無論您感興趣的底物（質粒,、siRNA、蛋白質或化合物）如何,，我們始終建議使用我們的 pmaxGFP™ 載體進行優(yōu)化,。使用 pmaxGFP™ Vector 進行優(yōu)化消除了許多變量,，例如底物制備的性質和質量以及分析時間。

Q：我應該以什么 Nucleofection™ 體系進行優(yōu)化,？
· 4D-Nucleofector™ X 單元旨在簡化優(yōu)化步驟,。我們建議使用 20 μl Nucleocuvette™ Strips 進行優(yōu)化，減少珍貴細胞的消耗,。確定最佳條件后,，您可以使用相同的方案，通過將細胞數(shù)量和底物數(shù)量乘以 5 來簡單地切換到 100 μl Nucleocuvette™,。

Q：如何優(yōu)化 4D-Nucleofector™ X 單元上的 Nucleofection™ 條件,？
首先我們將訪問Lonza 開放的數(shù)據(jù)庫，查找相關程序及方案,。
當您的細胞沒有推薦的方案時,，將適用以下三種情況之一：
· 如果沒有任何可用的建議，則開始第一輪優(yōu)化,。幾種 Nucleofector™ 試劑（原代細胞的 P1 至 P5 和細胞系的 SE,、SF 和 SG）中的每一種都將使用 15 個不同的程序進行測試。
· 遵循基本的 4D-Nucleofector™ X 單元方案（如果有）,。使用少量的程序 (6–7個) 測試一個或兩個 Nucleofector™ 試劑,。
· 數(shù)據(jù)庫描述了 4D-Nucleofector™ X 單元的 Nucleofection™ 條件和數(shù)據(jù)。您可以選擇測試它們或返回前兩個選項之一,。

Q：何進一步改善我的 Nucleofection™ 條件,？
一旦從第一輪優(yōu)化中獲得 Nucleofection™ 的結果，您可以使用我們基于 Web 的優(yōu)化表格請求我們的反饋,，或將您的結果通過電子郵件發(fā)送
參考下方的優(yōu)化策略,，可能會改善您的 Nucleofection™ 結果：
· 在表格中選擇效果好的初始程序（例如 DN-100）。表格中間垂直列出的是第一輪優(yōu)化中描述的 15 個程序,。
· 使用所選程序左側的程序來提高細胞活力（例如 DH-100）,。使用右側的程序來提高轉染效率（例如 ER-100）