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一,、生物素簡介
生物素（biotin,，B）分子量244．31D．生物素分子有兩個環(huán)狀結(jié)構(gòu)，其中Ⅰ環(huán)為咪唑酮環(huán),，是與親和素結(jié)合的主要部位,；Ⅱ環(huán)為噻吩環(huán)，C2上有一戊酸側(cè)鏈,，其末端羧基是結(jié)合抗體和其他生物大分子的結(jié)構(gòu),，經(jīng)化學(xué)修飾后，生物素可成為帶有多種活性基團的衍生物——活化生物素,。
生物素是水溶性B族維生素,，以前稱為維生素H或輔酶R。它是羧化酶的輔酶,，其與纈氨酸,、脂肪酸、異亮氨酸等的合成有關(guān),。
連接各種反應(yīng)基團的生物素被用來標記蛋白質(zhì)或抗體,。生物素標記的蛋白或抗體可用鏈霉素耦聯(lián)的HRP或磁珠進行檢測或純化。
二,、生物素化試劑包含3種：
a. 伯胺反應(yīng)性生物素化試劑
伯胺生物素化試劑基于水溶性分為兩組：NHS-酯和磺基-NHS-酯,。
1.NHS-酯的特點：
蛋白質(zhì)標記-生物素化抗體或其它蛋白質(zhì)，用于檢測或純化,；
細胞內(nèi)標記-膜滲透性,，可用于標記細胞內(nèi)部；
胺反應(yīng)性-與伯胺（-NH2）反應(yīng),，例如賴氨酸的側(cè)鏈或N端伯胺,；
溶解性-水不溶性，必須溶解在DMSO或DMF中,，然后在水溶性緩沖液中進一步稀釋,。
2.磺基-NHS-酯的特點：
蛋白質(zhì)標記-生物素化抗體,，用于固定、純化或檢測,；
細胞表面標記-不穿透質(zhì)膜,，僅生物素化細胞的表面蛋白；
胺反應(yīng)性-與伯胺（-NH2）反應(yīng),，例如賴氨酸的側(cè)鏈或N端伯胺,；
溶解性-易溶于水，可用于不能耐受有機溶劑的應(yīng)用,。
b. 巰基反應(yīng)性生物素化試劑
巰基反應(yīng)性生物素化試劑分為兩類：生物素-HPDP和碘乙?；?LC-生物素。
1.生物素-HPDP的特點：
蛋白質(zhì)標記-生物素化抗體或其它蛋白質(zhì),；
巰基反應(yīng)性-與巰基（-SH）反應(yīng),，例如半胱氨酸（C）的側(cè)鏈；
吡啶基二硫醇活化-在pH6.5至7.5的緩沖液如PBS中反應(yīng),；
可逆-形成二硫鍵,，其可以使用DTT或其它還原劑切割；
溶解性-水不溶性,，必須溶解在DMSO或DMF中,，然后在水溶性緩沖液中進一步稀釋。
2.碘乙?；?LC-生物素的特點：
蛋白質(zhì)標記-生物素化抗體或其它蛋白質(zhì),；
細胞內(nèi)標記-膜可透過，可用于標記細胞內(nèi)部,；
巰基反應(yīng)性-與巰基（-SH）反應(yīng),，例如半胱氨酸（C）的側(cè)鏈；
碘乙酰激活-反應(yīng)在pH7.5至8.5的Tris或硼酸鹽緩沖液中避光進行,；
不可逆-形成不可逆性硫醚鍵,，間隔臂不能被切割；
溶解性-水不溶性,，必須溶解在DMSO或DMF中,，然后在水溶性緩沖液中進一步稀釋。
c. 羰基反應(yīng)性生物素化試劑
生物素-酰肼是通常用于靶向聚糖和糖蛋白的蛋白修飾試劑,。
生物素-酰肼的特點
糖蛋白標記-在唾液酸殘基上生物素化糖基化蛋白,，用于檢測或純化；
細胞表面標記-生物素化和分離細胞表面糖蛋白,；
醛反應(yīng)性-與糖基高碘酸鹽氧化形成的醛反應(yīng),；
酰肼活化-在pH值為4~6的緩沖液如乙酸鈉中進行反應(yīng)；
不可逆的-形成半不可逆性腙鍵,；間隔臂不能被切割,；
溶解性-通常溶于DMSO,，然后在水溶性緩沖液中進一步稀釋。
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