一般酶標儀的測定波長在400～750nm或800nm之間，可以滿足ELISA的顯色測定,。ELISA試劑盒所使用的標記用酶均為辣根過氧化物酶(HRP),，底物通常為四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD)，其在過氧化氫溶液的存在下,，經(jīng)HRP作用,，分別氧化為2，2,，—二氨基偶氮苯(DAB)和聯(lián)苯醌。當pH值為5.0左右時,，DAB在450nm波長處有最大吸收,，當pH值降為L0時,，最大吸收波長移至492nm,，同時摩爾消光系數(shù)變大,，顯色加深，因而常用強酸如硫酸或鹽酸終止反應,。TMB的氧化產物聯(lián)苯醌在波長450nm處有最大消光系數(shù),，如果HRP量少,，H：O：和TMB過量時,，則形成藍色的陽離子根,。降低pH,，即可使藍色的陽離子根轉變?yōu)辄S色的聯(lián)苯醌，使用硫酸作為終止劑可使產物穩(wěn)定90min,。因此，450nm和492 nm兩個波長是目前ELISA測定常用的,。各種酶標儀都配有放置濾光片的可自動轉換的部件,，可以同時安裝6～8片濾光片,，所配備的濾光片均應包括上述兩個波長，有的酶標儀以490nm濾光片替代492nm濾光片，影響不大,。