蛋白和核酸不一樣,具有很強(qiáng)的多樣性,。Protein A280功能應(yīng)用于檢測(cè)那些含有Trp,、Tyr殘基或者含有Cys-Cys二硫鍵的純蛋白,這些蛋白在280nm吸光度明顯,。本機(jī)方法不需要構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線,,而是檢測(cè)吸光度后,直接計(jì)算蛋白濃度,。
Protein A280顯示紫外吸收光譜,,檢測(cè)280nm處的吸光度后計(jì)算濃度(mg/ml)。和核酸檢測(cè)一樣,,Protein A280記錄顯示的是10mm光程下的數(shù)據(jù),。
Nano-600在基座模式下可以多檢測(cè)90mg/ml的BSA而不用稀釋。
當(dāng)檢測(cè)樣品的吸光后的光強(qiáng)小于200時(shí)(10mm光程下),,軟件會(huì)提示用戶選擇更小的測(cè)量光程,,以保證測(cè)試的準(zhǔn)確性。
決定液體表面張力的主要因素是溶液中水分子之間的氫鍵,,通常情況下,,水中的物質(zhì),如蛋白,、鹽離子,、去污劑等都會(huì)通過(guò)破壞水分子之間的氫鍵來(lái)減小表面張力。雖然對(duì)于大部分樣品來(lái)說(shuō),1ul的量就足夠用于檢測(cè)了,,但由于表面張力下降,,我們建議使用2ul的量以保證形成液柱。
可選擇或取消基線校準(zhǔn),。蛋白檢測(cè)默認(rèn)的基線校準(zhǔn)波長(zhǎng)為340nm,,用戶可根據(jù)試驗(yàn)需要輸入不同的校準(zhǔn)波長(zhǎng)。在任何情況下,,基線都自動(dòng)設(shè)定為選擇波長(zhǎng)下的吸光度,,所有波長(zhǎng)的吸光度讀數(shù)都是減去這個(gè)值的結(jié)果。
注意:基線校準(zhǔn)必須在進(jìn)行樣品檢測(cè)之前設(shè)定,,樣品檢測(cè)之后設(shè)定無(wú)效,。不選擇基線校準(zhǔn),光譜值將會(huì)產(chǎn)生偏移,,計(jì)算的濃度也會(huì)改變,。
⑵操作步驟:
①設(shè)定項(xiàng)目名稱和樣品編號(hào)與蛋白類型;
②使用緩沖液建立空白對(duì)照:取2ul空白溶液加到下基座上,,放下上基座并點(diǎn)擊“空白”,;
③使用干凈無(wú)塵布把基座上的空白溶液擦干凈;
④取2ul樣品滴加到下基座上,,放下上基座,,點(diǎn)擊“樣品”進(jìn)行檢測(cè);
注意:每次檢測(cè)的樣品都必須是剛加入的,。
⑤檢測(cè)完成后,,必須用干凈的無(wú)塵布擦掉上下基座上的樣品,才可以檢測(cè)下一個(gè)樣品,。
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