分光光度計是利用物質(zhì)對光的選擇性吸收的特性,，以較純的單色光作為入射光,，測定物質(zhì)對光的吸收，從而對物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析的儀器,。在使用過程中常常會出現(xiàn)測量誤差,，這些誤差又是如何產(chǎn)生的呢？

1.1復(fù)色光對比耳定律的偏離

比耳定律成立的前提條件是人射光是單色光,，但是精度再高的儀器,，即使是雙單色器的分光光度計，也只能獲得近乎單色的光,，無法獲得純單色光,，它仍然含有狹窄光通帶，具有復(fù)色光的性質(zhì),。而復(fù)色光會導(dǎo)致比耳定律的正或負(fù)偏離,。

固定狹縫的紫外分光光度計光譜帶寬一般為1nm或2nm，可調(diào)狹縫的可以做到0.Inm,；可見分光光度計帶寬6nm,、snm,，甚至十幾納米。

光譜帶寬應(yīng)該是越小越好,，但是隨著光譜分辨率的提高,，儀器的靈敏度降低，所以選擇儀器時要綜合考慮各種條件的影響,。當(dāng)溶液濃度較小且單色光較純時,，可近似認(rèn)為符合比耳定律。

1.2雜散光的影響

雜散光是指進(jìn)人檢測器的處于待測波長光譜帶寬范圍外的其他波長組分,，它是光譜測量中誤差的主要來源,。

產(chǎn)生原因有:分光光度計的色散元件、反射鏡,、透鏡及單色器內(nèi)壁灰塵等,。在分光光度計工作波段邊緣波長處，由于單色器透光率,、光源輻射強(qiáng)度,、檢測器靈敏度都較低，雜散光的影響更為顯著,。

雜散光限制儀器的分析上限可引起嚴(yán)重的測量誤差,，實際工作中,，在定量分析時,，一般在吸收峰或其附近處測量樣品吸光度,，如果在分析波長處含有雜散光，這時樣品的透光率較小,，而雜散光大部分透過,，使測量吸光度低于真實吸光度。

1.3儀器噪聲對測t的影響

儀器噪聲也是儀器的一個重要指標(biāo),，它表征儀器做稀溶液的能力,。是疊加在待測量的分析信號中的不需要的信號，掃描100%T和0%T線,，可觀察到分光光度計的絕對噪聲水平,，如果儀器噪聲較大，會掩蓋較小的測量信號,，一般用噪音的二倍來表示儀器的靈敏度,。

1.4波長和吸光度準(zhǔn)確度

樣品的每一個值都是在一定的波長下測得的，如果波長誤差很大,，測出的值肯定不準(zhǔn),。吸光度準(zhǔn)確度也是用戶對儀器的直接要求，更應(yīng)引起足夠的重視,。

國家計量檢定規(guī)程規(guī)定雙光束紫外可見分光光度計透射比準(zhǔn)確度為A等級士0.6%,， B等級土1.0%。

2測量條件的選擇

2.1參比溶液和溶荊的選擇

分光光度計的測量實際上是以通過參比池的光強(qiáng)度作為人射光強(qiáng)度來測定試樣的吸光度,，先調(diào)節(jié)儀器使透過參比池溶液的吸光度為零,，然后讓同一束光通過樣品，使得吸光度比較真實地反映待測物質(zhì)的濃度,，所以參比溶液的選擇非常重要,。

如果僅有待測物質(zhì)與顯色劑的反應(yīng)產(chǎn)物有吸收，可用純?nèi)軇┗蛘麴s水作參比溶液,。如果顯色劑有顏色,，并在測定波長下有吸收，則用顯色劑溶液作參比溶液,，所加人顯色劑及其它試劑的量,，與試樣中的加入量應(yīng)一致。

如果樣品中其它組分本身的顏色對測定有干擾,，而所用顯色劑沒顏色,，則用不加顯色劑的樣品溶液作參比液。

正確選擇合適的溶劑,，對提高分析的準(zhǔn)確度起重要作用,。為減小溶劑中雜質(zhì)的影響，應(yīng)選擇高純度的溶劑,；溶劑應(yīng)不與待測物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng),；待測物在溶劑中要有一定的溶解度；在測定的波長范圍內(nèi),，溶劑本身沒有吸收,，注意常用溶劑的最短可用波長；當(dāng)用揮發(fā)性大的溶劑時,，測量過程中吸收池應(yīng)加蓋,。

2.2測試波長的選擇

當(dāng)用分光光度計對溶液進(jìn)行測定時，首先需要選擇合適的測量波長,。選擇的依據(jù)是該被測溶液的吸收曲線,。在一般情況下，我們總是選擇最大吸收波長作為測量波長,，這樣可以提高靈敏度,。

而在有些情況下最大吸收峰很尖銳、吸收過大或附近有干擾存在,，就不能選最大吸收波長,，而必須在保證有一定靈敏度的情況下，選擇吸收曲線中的其它波長進(jìn)行測定(曲線較平坦處對應(yīng)的波長)，以消除干擾,。繪制吸收曲線是正確選擇波長的有效手段和方法,。

3、分光光度計的檢驗小妙招

波長準(zhǔn)確度的檢驗

分光光度計在使用過程中,，由于機(jī)械振動,、溫度變化、燈絲變形,、燈座松動或更換燈泡等原因,，經(jīng)常會出現(xiàn)刻度盤上的讀數(shù)與實際通過溶液的波長不符合的現(xiàn)象，因而導(dǎo)致儀器靈明度降低,，影響測定結(jié)果的精度,，需要進(jìn)行檢驗。

檢驗波長準(zhǔn)確度簡單的方法是用干涉濾光片或鐠釹濾光片測量儀器的吸收峰值, 如果測出的值與濾光片標(biāo)準(zhǔn)值之差超出規(guī)程規(guī)定, 則需要進(jìn)行波長調(diào)節(jié),。

透射比正確度的檢驗

用透射比標(biāo)準(zhǔn)值分別為10 %,、20 %、30 %左右的光譜中性濾光片,，可見光區(qū)分別在440,、546、635nm波長處,，以空氣為參比,，分別測量各濾光片的透射比，紫外光區(qū)用重鉻酸鉀溶液分別在235,、257,、313、350nm波長處,，以高氯酸溶液為參比,，測量其透射比。

穩(wěn)定度的檢驗

在零點(diǎn)不受光的條件下,，用零點(diǎn)調(diào)節(jié)器將儀器調(diào)至零點(diǎn),，觀察3分鐘讀取透射比的變化，即為零點(diǎn)穩(wěn)定性,。在儀器測量范圍兩端向中間靠10nm處,，調(diào)節(jié)零點(diǎn)后，蓋上樣品室蓋(打開光門),，使光電管受光,，調(diào)節(jié)透射比為95%（數(shù)顯儀器調(diào)至100%）察3分鐘讀取透射比的變化，為光電流穩(wěn)定性,。

光的檢驗

可見分光計棱鏡式儀器在420nm處,，光柵式儀器在360nm處，紫外分光計在220nm處分別用符合規(guī)定的截止濾光片，以空氣為參比,，測量其透射比值,，即為儀器在相應(yīng)波長下的雜散輻射率。