簡析各類細胞轉(zhuǎn)染方法

　　細胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA,，RNA等導(dǎo)入真核細胞的技術(shù),。定義 隨著分子生物學(xué)和細胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細胞基因功能的常規(guī)工具,。

　　下文中將從多個維度,，介紹細胞轉(zhuǎn)染的各類小知識。

一,、瞬時轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染

　　哺乳動物細胞表達系統(tǒng)能促使在其內(nèi)表達的蛋?正確折疊并進行復(fù)雜修飾,，表達的蛋?更接近真實自然狀態(tài)，便于模擬真實細胞內(nèi)環(huán)境,，進行蛋白功能研究,。把目的基因轉(zhuǎn)入哺乳動物細胞，表達?產(chǎn)蛋?通常有兩種?式：瞬時轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（構(gòu)建穩(wěn)定細胞系）,，如圖1.所示,。

　　瞬時轉(zhuǎn)染與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染有如下特點：

二,、轉(zhuǎn)染方法

　　細胞轉(zhuǎn)染方法可分為化學(xué)法,，物理法，生物法,，也可把化學(xué)法,、物理法稱為非病毒載體，生物法稱為病毒載體,。不同的轉(zhuǎn)染方法可分別用于瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,，不過效率與效果不同。

三,、病毒載體也是細胞轉(zhuǎn)染的產(chǎn)物

　　病毒介導(dǎo)轉(zhuǎn)染是目前在細胞治療等應(yīng)用中有前景的方向,，化學(xué)法,，物理法在實施過程中，對細胞均有一定程度的損害,，所以用于細胞治療藥物的研究受到限制,。病毒介導(dǎo)轉(zhuǎn)染也叫侵染。人類有漫長的和病毒斗爭的歷史,，對病毒研究較為清晰,，改造后病毒轉(zhuǎn)染結(jié)果相對可以控制。目前使用病毒載體的藥物已經(jīng)有多個上市,，比如SMA基因治療藥物采用AAV病毒遞送,，一針200萬美元，已上市3個CART用慢病毒或逆轉(zhuǎn)錄病毒（HIV的變種）來轉(zhuǎn)入基因,，已上市的埃博拉病毒疫苗用AD26病毒載體等,。

　　病毒載體的制備是目前CRO服務(wù)中的重要內(nèi)容，病毒載體的生產(chǎn)（如圖）先用大腸桿菌等生產(chǎn)出質(zhì)粒,，然后把多種質(zhì)粒（通常是三質(zhì)?；蛩馁|(zhì)粒系統(tǒng)）通過轉(zhuǎn)染進入細胞中，表達出病毒載體的外殼蛋白,、功能蛋白等,，然后組裝成含目的基因的病毒載體，通過純化工藝獲得工具病毒,，工具病毒感染細胞,，腺病毒可于轉(zhuǎn)染成功2小時后即可檢測到表達產(chǎn)物，逆轉(zhuǎn)錄病毒則需要經(jīng)過多輪賽選,，選擇基因整合進細胞基因組的穩(wěn)定細胞株,，用于后續(xù)研究。

Ps：李記生物EZ Trans細胞轉(zhuǎn)染試劑可用于各類病毒包裝,。