物質(zhì)本身性質(zhì)決定,光的波長(zhǎng),溶液濃度,濃度越大,吸光度越大,溶液厚度,越厚,吸光度越大.
1、 受有色物質(zhì)穩(wěn)定性的影響,；
2,、受比色皿潔凈度和配對(duì)性的影響；

3,、受參比溶液版選擇權(quán)的影響,；
4、受儀器波長(zhǎng)精度的影響,；
5,、受分光光度計(jì)穩(wěn)定性的影響；
6,、受儀器吸光度測(cè)定準(zhǔn)確性的影響,；
7、受檢測(cè)人員技術(shù)水平的影響,；
8,、受顯示溶液配制濃度誤差的影響。
　一,、樣品的稀釋濃度

    樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素,，由于樣品中不可避免存在一些細(xì)小的顆粒,，尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測(cè)試效果,。為使較大程度減少顆粒對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響,，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值在0.1-1.5A,。在此范圍內(nèi),，顆粒的干擾相對(duì)較小，結(jié)果穩(wěn)定,。從而意味著樣品的濃度不能過(guò)低,，或者過(guò)高(超過(guò)光度計(jì)的測(cè)試范圍)。

　二,、核酸本身物化性質(zhì)

　　溶解核酸的緩沖液的pH值,、離子濃度等在測(cè)試時(shí)，離子濃度太高也會(huì)導(dǎo)致讀數(shù)漂移,，因此建議使用pH值一定,、離子濃度較低的緩沖液(如TE)可大大穩(wěn)定讀數(shù)。核酸的吸光值受pH值和緩沖液離子濃度影響,。只有在一定的pH值和低離子濃度的條件下(如10mMTris-HClpH8.0),，才能得到精確的檢測(cè)結(jié)果。水的pH值不穩(wěn)定,，可能導(dǎo)致檢測(cè)誤差,。一些緩沖液在紫外范圍內(nèi)存在自身吸收，為了確保準(zhǔn)確測(cè)量,，請(qǐng)使用與懸浮或洗脫樣品時(shí)相同的緩沖液,。

　三、分光光度計(jì)操作因素

　　1,、使用儀器前,，使用者應(yīng)該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理，以及各個(gè)操縱旋鈕之功能,。

　　2,、儀器應(yīng)放在干燥的房間內(nèi)，使用時(shí)放置在堅(jiān)固平穩(wěn)的工作臺(tái)上,，室內(nèi)照明不宜太強(qiáng),。熱天時(shí)不能用電扇直接向儀器吹風(fēng)，防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定,。

　　3,、在未按通電源之前，應(yīng)該對(duì)儀器的安全性能進(jìn)行檢查,，電源接線應(yīng)牢固,，通電也要良好,，各個(gè)調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確，然后再按通電源開(kāi)關(guān),。在儀器尚未接通電源時(shí),，電表指針必須于“0”刻線上，不是這種情況可以用電表上的校正螺絲進(jìn)行調(diào)節(jié),。

　　4,、若大幅度改變測(cè)試波長(zhǎng)，需稍等片刻,，等燈熱平衡后,，重新校正“0”和“100”點(diǎn)，然后再測(cè)量,。

　　5,、比色皿使用完畢后，立即用蒸餾水沖洗干凈,，并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去,，以防止表面光潔度被破壞，影響比色皿的透光率,。