植物基因組提取試劑盒的用途與合成方法,！

一、背景

本試劑盒采用可以特異性結(jié)合DNA的離心吸附柱和*的緩沖液系統(tǒng),，能提取多種植物細胞/組織中的基因組DNA,。離心吸附柱可以高效、專一吸附DNA,，可限度去除雜質(zhì)蛋白及細胞中其他有機化合物,。提取的基因組DNA片段大，純度高,，質(zhì)量穩(wěn)定可靠,。

二、適用范圍

使用本試劑盒回收的DNA可適用于各種常規(guī)操作,，包括酶切,、PCR,、文庫構(gòu)建、Southern雜交等實驗,。

三,、保存條件

本試劑盒在室溫（25℃左右）干燥條件下，可保存1年,；更長時間的保存可置于2–8℃,。2–8℃保存條件下，若溶液產(chǎn)生沉淀,，應在使用前置于37℃下溶解沉淀至溶液澄清后再使用,。單獨包裝的RNaseA收到后-20℃保存。

四,、純度檢測

基因組DNA片段的大小與樣品保存時間,、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)。提取的DNA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度,?？膳渲?.8-1.0％瓊脂糖凝膠，使用λ/HindIII判斷基因組的大小,，完整的基因組大小應在23kb以上,。使用分光光度計檢測時，OD260/OD280比值應為1.7–1.9之間,，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,，而使用去離子水洗脫，比值可能偏低,，但并不表明DNA純度不高,。

五、準備工作

1,、準備液氮,；65℃水浴,；無水乙醇,；1.5ml滅菌離心管。

2,、按照標簽所示在緩沖液AP3和漂洗液PW中加入無水乙醇,，混勻后蓋緊瓶蓋后室溫貯存?zhèn)溆谩?/span>

3、每次使用前請檢查緩沖液AP1,，緩沖液AP2和緩沖液AP3是否有沉淀生成,，如果出現(xiàn)沉淀，37℃溫浴至沉淀溶解后再使用,。

六,、操作步驟

如非指出,，所有離心步驟均為使用臺式離心機在室溫下離心,。

1,、取適量植物新鮮組織500mg-1g加入液氮充分研磨，取約100mg粉末置于1.5ml離心管中,，加入400 μl 緩沖液AP1和6 μl RNaseA (10mg/ml),，漩渦震蕩1分鐘。

2,、將離心管放在65℃水浴10分鐘,，水浴過程中顛倒離心管以混合樣品數(shù)次。

3,、加入130 μl 緩沖液AP2,，顛倒混勻，冰浴5分鐘,。

4,、12,000rpm離心5分鐘。

注：此步驟離心去除去垢劑,，蛋白以及多糖等雜質(zhì),。

5、取上清（通常為400 μl）轉(zhuǎn)移到過濾柱CF中,，12,000rpm 離心1分鐘,。

6、將濾出液轉(zhuǎn)移到1.5 ml離心管中,，加入1.5倍體積（例如400 μl的上清液加600 μl緩沖液AP3）緩沖液AP3（使用前請注意是否已經(jīng)加入無水乙醇）,，立即顛倒混勻，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠,。

7,、吸取步驟6中的混合液加入到吸附柱CG中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm離心1分鐘,，倒掉廢液,，吸附柱CG放回收集管中。

注：離心吸附柱的容積是700μl,，如果一次不能*上柱,，可以分次上柱離心，保證全部溶液全部加到離心柱中,。

8,、向吸附柱CG中加入500 μl漂洗液PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm離心1分鐘,，倒掉廢液,，吸附柱CG放入收集管中,。

9、重復步驟8,。

10,、可選步驟：如果離心柱的吸附膜上有顏色，向吸附柱CG中加入500 μl無水乙醇,，12,000 rpm離心1分鐘,，倒掉廢液，吸附柱CG放入收集管中,。

11,、將吸附柱CG放回廢液收集管中，12,000 rpm離心2分鐘,。

注：此步驟非常重要,，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除。漂洗液中乙醇的殘留會影響后續(xù)的酶反應（酶切,、PCR等）實驗,。

12、將吸附柱CG轉(zhuǎn)入一個干凈的1.5ml離心管中,，向吸附膜的中間部位懸空滴加50-100 μl經(jīng)65℃水浴預熱的洗脫緩沖液EB,，室溫放置2分鐘，12,000 rpm g離心2分鐘,。

注,；1.洗脫緩沖液體積不少于50 μl，體積過小影響回收效率,。

2.洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響,。若用水做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5范圍內(nèi)，pH值低于7.0會降低洗脫效率,。

13,、DNA產(chǎn)物-20℃保存。