基因與細(xì)胞治療領(lǐng)域的病毒載體生產(chǎn)用細(xì)胞株的開發(fā)

來源：廣州市艾貝泰生物科技有限公司 2022年05月26日 09:40

基因治療被認(rèn)為是許多嚴(yán)重的和危及生命的疾病有效的治療手段,，得到越來越多人的關(guān)注,。同時(shí)，基因治療的適應(yīng)癥正從罕見/極罕見疾病向更常見疾病發(fā)生轉(zhuǎn)變,，患者數(shù)量和綜合療法越來越多,。因而，大規(guī)模的基因治療病毒載體生產(chǎn)是行業(yè)的迫切需求,。

2020年,，F(xiàn)DA更新了關(guān)于基因治療臨床試驗(yàn)申請(INDs)的化學(xué)、制造和控制指導(dǎo)原則,，內(nèi)容包含穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株開發(fā)及細(xì)胞克隆性確證等,。文件指出,，細(xì)胞庫（Cell bank）的穩(wěn)定性及純度是一個(gè)需要考慮的重要方面。非單克隆來源的細(xì)胞群中,，其細(xì)胞異質(zhì)性相對較高,，產(chǎn)量低的細(xì)胞系往往與高產(chǎn)細(xì)胞群體競爭，導(dǎo)致高產(chǎn)細(xì)胞個(gè)體占比越來越少,，最終隨著傳代次數(shù)的增加,，導(dǎo)致細(xì)胞庫或工作庫的質(zhì)量下降，因此,，通過單克隆細(xì)胞篩選是提高病毒載體產(chǎn)量及質(zhì)量的重要步驟,。單克隆源性的確證是一種控制細(xì)胞種群降低其異質(zhì)性的方法，通過防止異種細(xì)胞群體的產(chǎn)生,，來保障未來生產(chǎn)出的病毒產(chǎn)品的質(zhì)量不受影響,。

CEVEC公司（CEVEC Pharmaceuticals）針對 ELEVECTA® AAV包裝細(xì)胞系的研究數(shù)據(jù)顯示，通過單克隆篩選出的細(xì)胞株其AAV產(chǎn)量要比非單克隆細(xì)胞來源的高10倍左右,。

張瑰宜博士在“生物藥生產(chǎn)用細(xì)胞株構(gòu)建和篩選策略”研討會(huì)上分享了她們使用Cytena 的單細(xì)胞打印機(jī)SCP的感受,，其噴墨式打印技術(shù)溫和而高效的分選單細(xì)胞，簡化篩選工作流程,，大大提高了單克隆有效率,，獲得了穩(wěn)定性高及一致性好的單克隆，用于后續(xù)的AAV生產(chǎn),，大大的提高了AAV產(chǎn)量,。

克隆HEK293細(xì)胞的記錄

HEK293單克隆細(xì)胞提高AAV產(chǎn)量

掃碼觀看直播回放

生物藥生產(chǎn)用細(xì)胞株構(gòu)建和篩選策略

英國著名的葛蘭素史克（GlaxoSmithKline，GSK）藥物研究中心報(bào)告了一種如何快速獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)的293T細(xì)胞,，生成慢病毒載體的方法：將編碼所有慢病毒載體成分的單個(gè) DNA 結(jié)構(gòu)體穩(wěn)轉(zhuǎn)入293T細(xì)胞,，單細(xì)胞打印機(jī)進(jìn)行單克隆篩選，獲取遺傳學(xué)和功能穩(wěn)定的適應(yīng)懸浮培養(yǎng)的生產(chǎn)用293細(xì)胞系,。由此產(chǎn)生的懸浮細(xì)胞系可生產(chǎn)出與瞬時(shí)轉(zhuǎn)染一樣高滴度的病毒,，可以在一次性攪拌罐生物反應(yīng)器中輕松放大，并且在后續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)中遺傳和功能穩(wěn)定,。此方法將降低慢病毒載體的大規(guī)模生產(chǎn)成本,，提升慢病毒載體在細(xì)胞治療中的應(yīng)用價(jià)值。（Chen Y H , Pallant C , Sampson C J , et al. Rapid lentiviral vector producer cell line generation using a single DNA construct[J]. Molecular Therapy — Methods & Clinical Development, 2020.）

在基因編輯領(lǐng)域,，Stephan Riesenberg等學(xué)者進(jìn)行細(xì)胞克隆基因型和靶基因拷貝數(shù)分析時(shí)使用 Cas9 核糖核蛋白和 DNA 供體電穿孔在 FRMD7 基因中編輯 409-B2 hiPSC,，分別用（不用）2 M M3814 處理細(xì)胞 3 天后使用單細(xì)胞打印機(jī)(Cytena)對細(xì)胞進(jìn)行單克隆化用于后續(xù)分析。文章中HEK293 和 K562 細(xì)胞的單克隆化也是通過使用單細(xì)胞打印機(jī)分選單細(xì)胞來獲得的,。（Stephan R , Manjusha C , Dominik M , et al. Simultaneous precise editing of multiple genes in human cells[J]. Nuclc Acids Research, 2019(19):19.）

Gross等采用f.sight™單細(xì)胞打印機(jī)，通過GFP報(bào)告基因,，用于選擇和克隆CRISPR/Cas9編輯以敲除RANKL蛋白的間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC),，以進(jìn)一步增強(qiáng)MSCs在再生醫(yī)學(xué)中的治療能力,。

分割線

參考資料

[1] 提升高產(chǎn)細(xì)胞株篩選效率，助力基因治療,、抗體藥物等工藝開發(fā)——單細(xì)胞打印機(jī)（附案例分享）

[2] 簡化CRISPR基因編輯的干細(xì)胞的工作流程,，提高單克隆效率

艾貝泰作為Cytena中國代理，公眾號(hào)（Applitech）中多個(gè)軟文詳細(xì)介紹Cytena單細(xì)胞打印機(jī)篩選原理,、功能更新,、應(yīng)用文獻(xiàn)以及案例分享等，掃碼關(guān)注公眾號(hào),，不間斷更新關(guān)于Cytena單細(xì)胞打印機(jī)以及其他代理品牌信息,。

掃碼關(guān)注了解更多信息???

相關(guān)產(chǎn)品

免責(zé)聲明

凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載,、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任,。
本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息,，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對其真實(shí)性負(fù)責(zé),，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體,、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任,。
如涉及作品內(nèi)容,、版權(quán)等問題，請?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利,。

基因與細(xì)胞治療領(lǐng)域的病毒載體生產(chǎn)用細(xì)胞株的開發(fā)

免責(zé)聲明

聯(lián)系我們

關(guān)注我們