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實驗室以及野外如何檢測熒光蛋白GFP RFP YFP

來源:上海路陽儀器有限公司   2022年05月19日 16:04  

  對蛋白亞細胞定位的認知可能表明,,蛋白可能在許多細胞進程中發(fā)揮作用。如果與下面所列的其中一種細胞器特異性試劑共定位,,那么可確認目的蛋白的亞細胞位置,。雖然這些細胞器標記物可用作強大的免疫熒光工具,但它們還可用作碎裂細胞裂解物的蛋白質印跡對照,。

這些蛋白的表達可能在不同細胞和組織中有所不同,。

  熒光蛋白的發(fā)光原理在于其發(fā)色基團經(jīng)一定波長的光(激發(fā)光)照射后被激活,并將能量以光能形式釋放,,這時我們就能在熒光顯微鏡下看到日思夜想的熒光色啦,!   

但由于能量不能全以光的形式輻射出來,所以熒光蛋白的發(fā)射光(熒光)的波長比激發(fā)光長,。

那么我們是怎么將熒光蛋白分類的呢,?通常,人們按發(fā)射波長來分類并定義其顏色(下圖),。

RFPs(紅色熒光蛋白): 

mCherry具有優(yōu)異光穩(wěn)定性,,通用紅色單體(但融合表達時有較弱的齊聚效應)

tdTomato具有mCherry相同的光穩(wěn)定性,亮度強,,是追蹤表達水平的理想選擇,,但為串聯(lián)二聚體,可以在融合標簽大小不干擾蛋白質功能的情況下使用

mStrawberry信號亮的紅色單體,,但光穩(wěn)定性要弱于mCherry

DsRed是細胞毒性小的RFP

mApple在蛋白的融合表達中是mCherry不錯的替代物,,但其光穩(wěn)定性要遠弱于mCherry

mKate2從參數(shù)方面考量是綜合亮度、光穩(wěn)定性和齊聚性的RFP,。

OFPs(橙色熒光蛋白):

mOrange橙色單體

YFPs(黃色熒光蛋白):

mVenus是亮度*的黃色單體

GFPs(綠色熒光蛋白):

EGFP

BFPs(藍色熒光蛋白):

mTagBFP2穩(wěn)定,,成熟快、亮度極亮的藍色單體

上面是通用一些熒光蛋白參數(shù),,再好的載體也需要找對合適的光源,,光源的選擇對于載體信號的激發(fā)也是*的,美國LUYOR公司實驗室儀器事業(yè)部致力于研究和開發(fā)熒光觀測裝備,,其產(chǎn)品系列有 LUYOR-3415RG雙熒光蛋白觀測燈,,LUYOR-3430、LUYOR-3260單熒光蛋白觀測手電筒,。熒光是各種各樣細胞生物學,、神經(jīng)系統(tǒng)學及其他領域研究中的一種強大和廣泛使用的工具。LUYOR的LUYOR-3415RG和LUYOR-3430,、LUYOR-3260除了可用于篩選轉基因生物外,,還可以用于樣本的預篩選,、輔助解剖、用于珊瑚研究等

  

LUYOR-3415RG雙熒光蛋白觀察燈的用途:

用于檢測,、篩選轉綠色熒光蛋白(GFP)和紅色熒光蛋白(DsRed)基因的植物,、動物及微生物,如水稻,、玉米,、斑馬魚、小鼠,、細:菌,、真菌等等...

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LUYOR-3415RG雙熒光蛋白觀察燈的產(chǎn)品優(yōu)勢:

1. 大功率輸出,無需暗室,,也可輕松激發(fā)熒光,。

2.檢測效率高,黑暗中檢測一目了然

3.LED壽命50000h,,且系統(tǒng)穩(wěn)定,,可長時間使用 

4.直接檢測,而無需用底物顯色,,所以安全,,對被檢測對象無傷害

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激發(fā)光源激發(fā)出綠色熒光時,用黃色濾光鏡觀測,,可檢測含綠色熒光蛋白(GFP)的生物,;激發(fā)光源激發(fā)紅色熒光時,用紅色濾光鏡觀測,,可檢測含紅色熒光蛋白(DsRed)的生物,。

 


注:


1. LUOYR-3415R用于觀測綠色熒光蛋白


GFP:綠色熒光;  fluorescein熒光素


2. LUOYR-3415C用于觀測黃色熒光蛋白


YFP:黃色熒光蛋白,;  Venus:金色,;  Lucifer Yellow:熒光黃


3. LUOYR-3415G用于觀測紅色熒光蛋白


DsRed:紅色熒光蛋白;   TdTomato:番茄紅


4. LUOYR-3415V用于觀測紫色熒光蛋白


CFP:青色熒光蛋白,;   BFP:堿性胎兒蛋白


5. LUOYR-3415U用于觀測:


DAPI:藍色熒光


LUYOR-3415熒光蛋白激發(fā)光源的物理技術參數(shù):

波長:可任意選擇2種波長:365nm,,400nm, 450nm,, 485nm,,520nm


質量:凈重0.9kg,毛重:4kg,,尺寸:180x200mm(長x高),,頭部直徑120mm。


功率:單波長15w,總功率27w,。


輸入電壓:交流100-260v,,頻率50/60Hz。


包裝箱尺寸:400x300x150mm(長x寬x高)


距燈150mm處照射直徑為180mm,。


LUYOR-3415熒光蛋白激發(fā)光源的標準配置:

luv-50觀察眼鏡,,luv-30觀察眼鏡,說明書,,合格證,,保修卡,,鋁合金手提箱,。


LUYOR-3415熒光蛋白激發(fā)光源的主要產(chǎn)品應用:

檢測轉綠色熒光蛋白(GFP)基因、紅色熒光蛋白(DsRed)基因植物:水稻,、小麥,、玉米、大豆,、棉花,、擬南芥

檢測轉GFP、DsRed基因動物:小鼠,、兔子,、猴子等;

檢測轉GFP,、DsRed基因微生物:細菌,、真菌、酵母等,;

檢測GFP,、DsRed基因組織特異性表達;


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