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柱效受柱內(nèi)外因素影響，為使色譜柱達(dá)到最佳效率,，除柱外死體積要小外,，還要有合理的柱結(jié)構(gòu)(盡可能減少填充床以外的死體積)及裝填技術(shù)。即使好的裝填技術(shù),，在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的,，靠近管壁的部位比較疏松，易產(chǎn)生溝流,，流速較快,，影響沖洗劑的流形，使譜帶加寬,，這就是管壁效應(yīng),。
色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，稍有不慎就會降低柱效,、縮短使用壽命甚至損壞,。在色譜操作過程中，需要注意下列問題,，以維護(hù)色譜柱,。
流動相因素
1.流動相pH
不同基質(zhì)的填料具有不同的pH適用范圍。常溫下無定形硅膠在純水中的溶解度約為100mg·L-1,，且在pH 1～9的范圍內(nèi)溶解的硅膠量幾乎是常量,，考慮到溶解速度的影響,對于硅膠基質(zhì)的填料,其所能承受的流動相pH范圍約為1～8。鍵合相硅膠填料則由于鍵合層的屏蔽作用,使填料對流動相的適應(yīng)范圍大大增加,，如現(xiàn)在廣泛使用的反相色譜填料C18 (十八烷基硅烷鍵合硅膠),，其pH適用范圍可達(dá)2～10。當(dāng)流動相pH值超出酸性范圍時,，鍵合相易發(fā)生水解而流失,；當(dāng)流動相pH超出堿性范圍時，會加速硅膠的溶解而釋放出絮狀物堵塞柱子,，這兩種反應(yīng)均是不可逆反應(yīng),，特別是在溫度較高(>40℃)的環(huán)境下，會使柱效迅速降低而報廢,。
2.流動相變質(zhì)
當(dāng)前使用最為廣泛的是硅基鍵合相填料,，當(dāng)以水溶液作為流動相或流動相中含有一定濃度的磷酸鹽緩沖液時,，水溶液中或緩沖鹽溶液中會滋生出一些細(xì)菌或霉菌，從而堵塞固定相顆粒間的空隙,。特別是對于多元自動比例混合的高效液相色譜儀來說,水相或緩沖鹽相獨立存貯,，因存放時間較長而容易發(fā)生此類問題。
3.流動相純度
目前,，廣泛使用的填料顆粒粒徑范圍在3～10μm,孔徑在6～10nm,色譜柱在使用中會有大量的流動相通過,如流動相含有微量不溶性雜質(zhì)顆粒,則很容易在柱頭部位被截留,久而久之,造成色譜柱機(jī)械性堵塞,引起柱壓升高而無法正常使用,。
4.其它因素
如，流動相的極性對柱子也有一定影響,，甲醇,、水、冰醋酸等極性較大的物質(zhì)會破壞硅膠填料柱,，正丁醇,、二氯甲烷等極性小的物質(zhì)會破壞化學(xué)鍵合硅膠柱，堿性溶液會破壞陽離子交換樹脂色譜柱,酸性溶液容易損壞陰離子交換樹脂柱,。
樣品因素
1.樣品的溶解性
樣品試樣在配制中，如有少量微粒未能*溶解,，則會隨試樣一起進(jìn)入色譜柱,，同樣，會沉積在柱頭處,，造成色譜柱的堵塞,。
2.樣品的純度
樣品中可能含有待分析組分以外的各種組分或雜質(zhì)，這些組分或雜質(zhì)可能會在柱內(nèi)產(chǎn)生不可逆吸附,，從而,，使固定相的活性點被覆蓋，保留特性發(fā)生變化,。
3.樣品的化學(xué)性質(zhì)
待測試樣中的各種組分與填料之間應(yīng)具有化學(xué)穩(wěn)定性,，比較典型的是在使用氨基鍵合柱時，應(yīng)避免使用含羰基的化合物和流動相,，如,，丙酮、乙酸乙酯等,，以免固定相中的NH2和酐,、酮發(fā)發(fā)希夫(Schiff)縮合而使固定相破壞。
其它因素
影響色譜柱壽命的因素很多,，除流動相和樣品因素外,，還有其它一些外在因素，如,，柱壓的影響,，溫度的影響,，色譜柱的正確沖洗，色譜柱的正確安裝等,。
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