一提到細(xì)胞培養(yǎng),，這是多少實驗者的噩夢,，簡直……說多了都是淚。

小編經(jīng)過軟磨硬泡終于從師兄師姐那里討到了細(xì)胞培養(yǎng)秘籍,，今天就大方一回,，分享給大家。

★ 血清與培養(yǎng)基的選擇

一般實驗血清的添加比例為10%,，也可根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)和生長速率適當(dāng)增加或減少添加比例,。

對于培養(yǎng)基，建議選擇商品化的,，比較成熟,，穩(wěn)定性也較好。

★ 培養(yǎng)瓶的選擇

目前商品化的細(xì)胞培養(yǎng)瓶主要為瓶蓋是否帶氣孔兩種,。其中不帶透氣孔細(xì)胞培養(yǎng)瓶擰緊后需適當(dāng)回旋瓶蓋,，保證CO₂能順利進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)瓶,。

細(xì)胞培養(yǎng)過程中，對于適應(yīng)能力強(qiáng)的腫瘤細(xì)胞,，可在傳代3-4次后更換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,。對于非腫瘤細(xì)胞系如293T等細(xì)胞，建議每次傳代更換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶來保證細(xì)胞狀態(tài),。

★ 細(xì)胞傳代

傳代時通常使用胰酶消化法,。該方法又分為干消化法和濕消化法。

?  濕消化法：待細(xì)胞變圓,，成流沙狀脫落時即可加入新鮮培養(yǎng)基終止消化,，1000rpm離心5min，棄去上清,，用新鮮培養(yǎng)基重懸傳代,。

?  干消化法：胰酶浸潤后棄去胰酶，待細(xì)胞變圓后加入新鮮培養(yǎng)基吹下后再進(jìn)行細(xì)胞傳代,。

不同細(xì)胞的細(xì)胞間連接強(qiáng)度不一樣,，消化時間不同；不同細(xì)胞的貼壁能力不同,，消化時間不同,；消化時應(yīng)觀察細(xì)胞形態(tài)，避免因過度消化影響細(xì)胞活性,。

★ 細(xì)胞凍存與復(fù)蘇

當(dāng)細(xì)胞生長狀況較好或者代數(shù)較早時,，需及時大量的凍存。

細(xì)胞凍存密度通常為1-3×10⁶個/ml,。通常4℃放置0.5h,，-20℃放置2h，-80℃冰箱中過夜,，取出凍存管,，移入液氮容器內(nèi)。

細(xì)胞復(fù)蘇38℃水浴不時搖動,，在1分鐘內(nèi)使其*融化,，1000rpm離心5min,棄去上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸移入培養(yǎng)瓶中,。

★ 污染防控

細(xì)胞培養(yǎng)最基本的是做好污染防控,，包括微生物污染的防控和細(xì)胞系間交叉污染的防控。

實驗中需保持良好的操作習(xí)慣,，所用材料的位置擺放要順手,，污染源和已滅菌物品要分開放置,。實驗室也需定期清潔與消毒,。

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