細(xì)胞培養(yǎng)基pH值改變的原因及解決辦法
pH值升高都有哪些原因,?
①隨著培養(yǎng)基開蓋時(shí)間的增長(zhǎng),pH值會(huì)不斷升高,;
---培養(yǎng)基中CO2揮發(fā),,導(dǎo)致溶液堿性升高。
②培養(yǎng)基存儲(chǔ)條件不合適,;
③操作時(shí)間過長(zhǎng),。
如何解決pH值升高的問題?
①*培養(yǎng)基盡量現(xiàn)配現(xiàn)用,,2~8℃下保存一周內(nèi)使用完,;
②培養(yǎng)基在2~8℃下避光保存;
③避免操作時(shí)間過長(zhǎng),。操作時(shí)間快速,、減少同時(shí)進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)數(shù)量。
pH值降低都有哪些原因,?
①在細(xì)胞生長(zhǎng)過程中,,產(chǎn)生細(xì)胞代謝產(chǎn)物乳酸,乳酸蓄積,,pH值通常會(huì)下降,;
②培養(yǎng)瓶蓋擰得過緊;
---細(xì)胞代謝產(chǎn)生的CO2無(wú)法溢出,,溶解于培養(yǎng)基中導(dǎo)致酸性變強(qiáng),。
③NaHCO3緩沖系統(tǒng)緩沖能力不夠;
④細(xì)菌,、酵母或真菌污染等,。
如何解決pH值降低的問題?
①及時(shí)傳代,、提高傳代比例或降低血清量;
②適當(dāng)松開瓶蓋,;
③增加培養(yǎng)液中NaHCO3濃度或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度(NaHCO3含量在2.0g/L到3.7g/L之間時(shí),,對(duì)應(yīng)的CO2濃度為5~10%),;
④若是微生物污染造成的,需及時(shí)丟棄培養(yǎng)基,,并對(duì)操作,、培養(yǎng)空間進(jìn)行消毒處理。
在什么情況下選擇HEPES緩沖體系呢,?
在開放式培養(yǎng)條件下(非5%CO2的培養(yǎng)環(huán)境),,細(xì)胞代謝產(chǎn)生的CO2迅速溢出,pH迅速升高,,使用HEPES緩沖液體系,,可以防止培養(yǎng)基pH值迅速變動(dòng)。
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