液相色譜是世界各地實(shí)驗(yàn)室使用的流行純化技術(shù),。如果系統(tǒng)設(shè)置和操作正確,，它可以立即從混合物中分離出所需的化合物,。學(xué)習(xí)如何使用和制備緩沖液和溶劑是能提高系統(tǒng)性能的重要技巧之一,。準(zhǔn)確制備和正確選擇緩沖液對(duì)于在液相色譜中獲得可重復(fù)的結(jié)果至關(guān)重要。

          一,、了解您的化合物

          如果您正在尋找混合物中的特定化合物,，您應(yīng)該使用最能將您的分析物與其他分析物分開的緩沖液/溶劑組合。例如,，了解極性和溶解度（極性或非極性）,、電離、您正在尋找的紫外吸光度將有助于指導(dǎo)您使用特定的色譜柱和溶劑組,。

          二,、純度

         使用較低等級(jí)且成本較低的試劑來制作緩沖液以節(jié)省一些錢是很誘人的,，但從長(zhǎng)遠(yuǎn)來看,，它最終會(huì)變得更加昂貴。與含有最少或不含雜質(zhì)的 HPLC 級(jí)試劑相比,，純度較低的試劑會(huì)導(dǎo)致不需要的峰和嘈雜的基線,。它們還會(huì)對(duì)您的系統(tǒng)造成嚴(yán)重破壞，造成阻塞,，從而導(dǎo)致系統(tǒng)故障和更昂貴的維護(hù)費(fèi)用,。所有試劑和溶劑，包括您使用的水,，都應(yīng)該是最高質(zhì)量的 HPLC 級(jí),，以減少緩沖液中不需要的微粒。高級(jí)試劑的成本可能比低級(jí)試劑略高,，但純度的差異是值得的,。HPLC 級(jí)試劑還有助于獲得更一致的結(jié)果并保持系統(tǒng)平穩(wěn)運(yùn)行,。

        即使是使用高純度實(shí)驗(yàn)級(jí)別的溶劑，也需要在進(jìn)入色譜系統(tǒng)前進(jìn)行過濾,，采用恒譜生溶劑過濾器可以有效過濾化學(xué)污染等雜質(zhì)進(jìn)入系統(tǒng),，通用于流動(dòng)相或輸液泵，配套用于外徑1/8英寸或1/16英寸的管子,，放置于流動(dòng)相溶劑瓶中,，過濾雜質(zhì)。過濾后,，溶劑應(yīng)儲(chǔ)存在有蓋的容器中,，以防止被灰塵或其他不需要的材料污染。

           四,、避免氣泡

        在與您的系統(tǒng)一起使用之前對(duì)緩沖液進(jìn)行脫氣或真空過濾可以最大限度地減少流動(dòng)相中的空氣和微粒,。如果液相色譜系統(tǒng)中發(fā)生流動(dòng)相脫氣，主要會(huì)影響泵和檢測(cè)器,。為了解決這個(gè)問題,，在將新制備的流動(dòng)相泵入 HPLC 系統(tǒng)之前進(jìn)行脫氣，連同在線脫氣器,，應(yīng)*脫氣以去除所有溶解的氣體,。*的脫氣形式是用氦氣或其他低溶解度氣體鼓泡。如果該方法可用,，建議在整個(gè)分析過程中以非常低的水平持續(xù)對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行脫氣,。

        五、定期檢查

         細(xì)菌幾乎可以在任何溶液中適應(yīng)和生長(zhǎng),，甚至是有機(jī)溶劑,，具體取決于濃度。為防止細(xì)菌生長(zhǎng)堵塞色譜柱篩板,，每次制備新的緩沖液批次時(shí)更換緩沖液容器,，檢查緩沖液瓶/袋是否有細(xì)菌生長(zhǎng)跡象。搖晃或攪拌時(shí)出現(xiàn)渾濁的溶液應(yīng)丟棄,。使用抑菌劑（例如 0.02% NaN3）處理會(huì)延長(zhǎng)溶液的儲(chǔ)存時(shí)間,，盡管這些試劑可能會(huì)影響您的色譜圖。

        六,、新鮮配置

        恒譜生建議稀釋緩沖液的有效期為一周,。這種做法可確保緩沖液的 pH 值不受長(zhǎng)期儲(chǔ)存的影響，并且不會(huì)出現(xiàn)微生物生長(zhǎng),。pH 值變化和微生物生長(zhǎng)都會(huì)影響您的色譜運(yùn)行并導(dǎo)致運(yùn)行之間的不一致,。雖然您可以添加穩(wěn)定劑，例如焦亞硫酸鈉,，但這些試劑會(huì)影響光學(xué)和色譜結(jié)果,。

        最后,，液相色譜法可能是一項(xiàng)具有挑戰(zhàn)性的技術(shù)。遵循上述關(guān)于如何準(zhǔn)備和使用緩沖液進(jìn)行純化的提示,，將有助于使每次運(yùn)行的一致性和可重復(fù)性,。