液相色譜儀由高壓液體泵,、檢測器及液相色譜柱等三部分組成，其中液相色譜柱的正確安裝和使用,，是液相色譜工作的關(guān)鍵,；也是液相色譜工作者獲得正確可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的必經(jīng)之路,。

     一、液相色譜柱的安裝：
     1,、液相色譜柱的結(jié)構(gòu)：
     a,、空柱由柱接頭、柱管及濾片組裝而成,。
       柱接頭采用低死體積結(jié)構(gòu),，柱接頭是兩端螺紋組件，一端是為7/16英寸外螺紋,，另一端是3／16英寸的內(nèi)螺紋(國內(nèi)外已規(guī)范化),。7／16英寸外螺紋與1／4英寸柱管(Φ6.35mm)連接，中間放置壓壞用于密封,。3／16英寸的內(nèi)螺紋與1／16英寸(Φ1.57mm)的連接管連接,，中間也放置壓環(huán)用于柱接頭的密封,。為了盡量減少柱外死體積，在安裝色譜柱時(shí),，用Φ1.57mm連接管通過空心螺釘壓環(huán)后要盡量插到底,，然后再擰緊空心螺釘。壓環(huán)被空心螺釘擠壓變形后緊箍在連接管上(連接管通過壓環(huán)后露出的管長度應(yīng)嚴(yán)格控制在2．5mm長或其他固定尺寸),。
       在兩端柱接頭內(nèi),，柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片(或?yàn)V網(wǎng))，用于封堵柱填料不被流動相沖出柱外而流失,?？罩鹘M件均為316#不銹鋼材質(zhì)，能耐受一般的溶劑作用,。但由于含氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性,，故使用時(shí)要注意，柱及連接管內(nèi)不能長時(shí)間存留此類溶劑,，以避免腐蝕,。
     b、柱填料：
       液相色譜柱的分離作用是在填料與流動相之間進(jìn)行的,，柱子的分類是依據(jù)填料類型而定,。
       正相柱：多以硅膠為柱填料,。根據(jù)外型可分為無定型和球型兩種,，其顆粒直徑在3—10 µm的范圍內(nèi)。另一類正相填料是硅膠表面鍵合—CN,，-NH2等官能團(tuán)即所謂的鍵合相硅膠,。
       反相柱：主要是以硅膠為基質(zhì)，在其表面鍵合十八烷基官能團(tuán)(ODS)的非極性填料,。也有無定型和球型之分,。
       常用的其他的反相填料還有鍵合C8、C4,、C2,、苯基等，其顆粒粒徑在3—10 µm之間,。

     2,，色譜柱的安裝：
     a、拆開柱包裝盒,，確認(rèn)色譜柱的類型,、尺寸、出廠日期以及柱內(nèi)貯存的溶劑,。
     b,、擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用,。
     c、按柱管上標(biāo)示的流動相流向,，將色譜柱的入口端通過連接管與進(jìn)樣閥出口相連接(如條件允許,，建議在柱前使用保護(hù)柱)；柱的出口與檢測器連接,。連接管是外徑為1.57mm,、內(nèi)徑為0.1-0.3mm的不銹鋼管。連接管的兩端均有空心螺釘及密封用壓環(huán),。在接管時(shí)一定要設(shè)法降低柱外死體積,。連接管通過空心螺釘、壓環(huán)后盡量用力插到底,，然后順時(shí)針擰緊空心螺釘,，直到擰不動為止，再用扳手繼續(xù)順時(shí)針擰1／4-1／2圈,，切記不要用力過大,。如色譜柱通過流動相加壓后有漏液現(xiàn)象，請用扳手繼續(xù)順時(shí)針擰1／4圈,，直至不漏液為止,。

     二、液相色譜柱的使用：
       色譜柱在使用前,，最好進(jìn)行柱的性能測試,，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價(jià)柱性能變化的參考,。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品,、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同,；另外,，在做柱性能測試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測試所使用的條件是最佳條件)，只有這樣,，測得的結(jié)果才有可比性,。

     1、樣品的前處理：
     a,、最好使用流動相溶解樣品,。
     b、使用予處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì),。
     ,、使用0.45µm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。
     2,、流動相的配制：
     液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的,，因此要求流動相具備以下的特點(diǎn)：
     a,、流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時(shí)間保留在柱中),。
     b,、流動相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外),。
     c,、流動相的黏度要盡量小，以便在使用較長的分析柱時(shí)能得到好的分離效果,；同時(shí)降低柱壓降,，延長液體泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。
     d,、流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng),。如使用UV檢測器，最好使用對紫外吸收較低的溶劑配制,。
     e,、流動相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡,，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行,。
     f、在流動相配制好后,，一定要進(jìn)行脫氣,。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用,。
     3,、流動相流速的選擇：
      因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù),，使用不同的流速可得到不同的柱效,。對于一根特定的色譜柱，要追求最佳柱效,，最好使用最佳流速,。對內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml／min,，對于內(nèi)徑為4.0mm柱,，流速0.8ml／min為佳。
     當(dāng)選用最佳流速時(shí),，分析時(shí)間可能延長,。可采用改變流動相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間(如使用反相柱時(shí),，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量),。