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細胞凍存有兩種方法：傳統(tǒng)的方法是利用冷存管處于4℃,、-20℃,、-80℃保存，程序降溫方法是利用程序降溫盒設定程序由室溫降低至-80℃,，最后再放置到液氮槽中長期保存,。程序降溫盒的使用注意事項如下：
實驗室雖然有程序降溫凍存盒，但怎么使用一直都搞不明白,，我覺得是不是應該把程序降溫凍存盒先從-80度移到室溫放一段時間(細胞剛開始還沒凍的時候就是室溫),，然后把細胞放進去，再一起移到-80度,，這樣才能實現(xiàn)程序降溫呢?時間使用長了,，感覺里面的液體是不是異丙醇啊，使用時間長了會不會揮發(fā)或變質什么的,，要不要添加或維護一下呢,，還有有一只降溫盒因不小心給傾斜讓液體流出了部分，要補充嗎?
經(jīng)驗1：凍存盒外表面有刻度的吧,，異丙醇液面要高于最底線,。
凍存盒肯定是先放在室溫，然后放進去細胞,，置于-80,，利用異丙醇實現(xiàn)梯度降溫啊,。)
根據(jù)論壇里的討論，異丙醇使用過一段時間后是要更換的,，但是我一直沒換過,，也沒發(fā)現(xiàn)很大問題,。
經(jīng)驗2：我們實驗室凍存盒平時放4度,，需要凍細胞時直接拿出來用就可以了。第二天轉移至液氮,，貴重的細胞盡快轉移,，不然會影響復蘇成活率的。一般是用5次就更換一下異丙醇?，F(xiàn)在也有一些商品化凍存液可以直接丟進-80的,，很方便，效果也不錯的,。
經(jīng)驗3：異丙醇的量是要保證的,，不能低于表明的線，否則不能起到很好的程序性降溫作用,，我們是在4度放置,，放了細胞后立馬放到-80度冰箱，第二天再轉移到液氮,，效果很不錯,。異丙醇熔點：-87.9度的色透明具有乙醇氣味的可燃性有毒液體。注意了有可燃性!急性毒性：口服-大鼠LD50:5840毫克/公斤;口服-小鼠LC50:3600毫克/公斤,。刺激數(shù)據(jù)：眼睛-兔子100毫克/!請注意清理!
經(jīng)驗4：應該不可以把凍存盒放4°的,，因為梯度降溫的起始點是室溫20°左右，所以從-80℃拿出來的凍存盒應該現(xiàn)在室溫靜置一段時間待其恢復到室溫再使用,。而其中的異丙醇應使用6~7此后更換一次,，而且保證液體量達到刻度線，否則降溫效果會受到影響,。
經(jīng)驗5：凍存盒里的異丙醇一般是250ml,，低于刻度了要加上，理論上是5次以后更換異丙醇,，但是異丙醇對環(huán)境有害,，我們可以多用幾次，只是少了的時候要加滿,。還有凍存液里面的DMSO對細胞有毒性,，尤其是室溫的時候，所以凍存盒和凍存液先放4°,，等把細胞用凍存液重懸好了放在凍存盒里,，還放回4°,，等到出細胞間的時候再拿到-80°里面保存。過夜再轉入液氮,。
程序降溫盒這個梯度降溫可大大提高細胞凍存的存活率,，由于程序降溫盒內存在*濃度的異丙醇和泡沫內襯，因此程序降溫盒也可以用于細胞復蘇
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