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液相色譜柱是一種用于液體色譜分析儀器,。
色譜是一種分離分析手段,，分離是核心,，因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟,。對色譜柱的要求是柱效高,、選擇性好,，分析速度快等。市售的用于HPLC的各種微粒填料好多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相,、氧化鋁,、有機(jī)聚合物微球（包括離子交換樹脂）、多孔碳等,，其粒度一般為3,，5，7，10um等,，柱效理論值可達(dá)5～16萬／米,。對于一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效；對于同系物分析,，只要500即可,；對于較難的分離物質(zhì)對則可采用高達(dá)2萬的柱子，因此一般10～30cm左右的柱長就能滿足復(fù)雜混合物分析的需要,。
柱效受柱內(nèi)外因素影響,，為使色譜柱達(dá)到佳效率，除柱外死體積要小外,，也要有合理的柱結(jié)構(gòu)（盡可能減少填充床以外的死體積）及裝填技術(shù),。即使好的裝填技術(shù)，在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的,，靠近管壁的部位比較疏松,，易產(chǎn)生溝流，流速較快,，影響沖洗劑的流形,，使譜帶加寬，這就是管壁效應(yīng),。這種管壁區(qū)大約是從管壁向內(nèi)算起30倍料徑的厚度,。在一般的液相色譜系統(tǒng)中，柱外效應(yīng)對柱效的影響遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于管壁效應(yīng),。
在選擇色譜柱之前,，先多了解自己的樣品和雜質(zhì)，他們的類型結(jié)構(gòu),、極性,、酸堿性、分子量大小等等,。
1.樣品是極性的且弱酸性的,；就可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測，即要選擇承受100%純水且對極性化合物保留很好的色譜柱
2. 如果樣品極性太強(qiáng),，或酸性太強(qiáng),；可以選擇CN，NH2,，或硅膠柱,，HILIC（親水色譜），也有使用C18+強(qiáng)陰離子對試劑或強(qiáng)陰離子交換色譜柱（缺點(diǎn)是離子對試劑平衡時間長,，對流動相pH要求比較精密,，否 則很難重復(fù)實驗,，另外離子對試劑很難洗下來，基本上用了離子對的色譜柱就不能再用于其它實驗）
3. 若樣品是堿性的,；可選擇高純硅膠柱（高純硅膠缺少金屬雜質(zhì),，且硅膠端基封尾）或一些經(jīng)過修飾的C18柱（如極性嵌入技術(shù)或堿去活技術(shù)等），他們都會減少堿性化合物的拖尾,，一般會選擇中性或偏堿的條件下做，因為這樣可增加堿性樣品的保留
4.如果堿性化合物的極性太強(qiáng),，或堿性太強(qiáng),；可以選擇寬pH的C18色譜柱在高pH值檢測（優(yōu)點(diǎn)是方法開發(fā)簡單，缺點(diǎn)是目前實 現(xiàn)這一技術(shù)的色譜柱品牌比較少,，價格也高）或者選用HILIC色譜柱（硅膠柱在反相條件下使用,，這也是檢測堿性樣品的方法）選擇強(qiáng)離子交換柱（缺點(diǎn) 是不能用來分析其它樣品，對流動相pH要求比較精密,，否則很難重復(fù)實驗）也有使用C18+強(qiáng)陰離子對試劑或強(qiáng)陰離子交換色譜柱
色譜柱的性能除了與固定相性能有關(guān)外,，還與填充技術(shù)有關(guān)。在正常條件下,，填料粒度>20um時,，干法填充制備柱較為合適；顆粒<20um時,，濕法填充較為理想,。填充方法一般有四種：
①高壓勻漿法，多有用于分析柱和小規(guī)模制備柱的填充,；
②徑向加壓法,；
③軸向加壓法，主要用于裝填大直徑柱,；
④干法,，柱填充的技術(shù)性強(qiáng)，大多數(shù)實驗室使用己填充好的商品柱,。
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