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液相色譜柱的產(chǎn)品應(yīng)用介紹
液相色譜柱是一種用于液體色譜分析儀器,。
色譜是一種分離分析手段,，分離是核心,，因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對(duì)色譜柱的要求是柱效高,、選擇性好,，分析速度快等。市售的用于HPLC的各種微粒填料好多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相,、氧化鋁,、有機(jī)聚合物微球（包括離子交換樹脂）、多孔碳等,，其粒度一般為3，5,，7,，10um等，柱效理論值可達(dá)5～16萬(wàn)／米,。對(duì)于一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效,；對(duì)于同系物分析，只要500即可,；對(duì)于較難的分離物質(zhì)對(duì)則可采用高達(dá)2萬(wàn)的柱子,，因此一般10～30cm左右的柱長(zhǎng)就能滿足復(fù)雜混合物分析的需要。
柱效受柱內(nèi)外因素影響,，為使色譜柱達(dá)到佳效率,，除柱外死體積要小外，也要有合理的柱結(jié)構(gòu)（盡可能減少填充床以外的死體積）及裝填技術(shù),。即使好的裝填技術(shù),，在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的，靠近管壁的部位比較疏松,，易產(chǎn)生溝流,，流速較快，影響沖洗劑的流形,，使譜帶加寬,，這就是管壁效應(yīng)。這種管壁區(qū)大約是從管壁向內(nèi)算起30倍料徑的厚度,。在一般的液相色譜系統(tǒng)中,，柱外效應(yīng)對(duì)柱效的影響遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于管壁效應(yīng)。
在選擇色譜柱之前,，先多了解自己的樣品和雜質(zhì),，他們的類型結(jié)構(gòu)、極性,、酸堿性,、分子量大小等等,。
1.樣品是極性的且弱酸性的；就可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測(cè),，即要選擇承受100%純水且對(duì)極性化合物保留很好的色譜柱
2. 如果樣品極性太強(qiáng),，或酸性太強(qiáng)；可以選擇CN,，NH2,，或硅膠柱，HILIC（親水色譜）,，也有使用C18+強(qiáng)陰離子對(duì)試劑或強(qiáng)陰離子交換色譜柱（缺點(diǎn)是離子對(duì)試劑平衡時(shí)間長(zhǎng),，對(duì)流動(dòng)相pH要求比較精密，否 則很難重復(fù)實(shí)驗(yàn),，另外離子對(duì)試劑很難洗下來(lái),，基本上用了離子對(duì)的色譜柱就不能再用于其它實(shí)驗(yàn)）
3. 若樣品是堿性的；可選擇高純硅膠柱（高純硅膠缺少金屬雜質(zhì),，且硅膠端基封尾）或一些經(jīng)過(guò)修飾的C18柱（如極性嵌入技術(shù)或堿去活技術(shù)等）,，他們都會(huì)減少堿性化合物的拖尾，一般會(huì)選擇中性或偏堿的條件下做,，因?yàn)檫@樣可增加堿性樣品的保留
4.如果堿性化合物的極性太強(qiáng),，或堿性太強(qiáng)；可以選擇寬pH的C18色譜柱在高pH值檢測(cè)（優(yōu)點(diǎn)是方法開發(fā)簡(jiǎn)單,，缺點(diǎn)是目前實(shí) 現(xiàn)這一技術(shù)的色譜柱品牌比較少,，價(jià)格也高）或者選用HILIC色譜柱（硅膠柱在反相條件下使用，這也是檢測(cè)堿性樣品的方法）選擇強(qiáng)離子交換柱（缺點(diǎn) 是不能用來(lái)分析其它樣品,，對(duì)流動(dòng)相pH要求比較精密,，否則很難重復(fù)實(shí)驗(yàn)）也有使用C18+強(qiáng)陰離子對(duì)試劑或強(qiáng)陰離子交換色譜柱
色譜柱的性能除了與固定相性能有關(guān)外，還與填充技術(shù)有關(guān),。在正常條件下,，填料粒度>20um時(shí)，干法填充制備柱較為合適,；顆粒<20um時(shí),，濕法填充較為理想。填充方法一般有四種：
①高壓勻漿法,，多有用于分析柱和小規(guī)模制備柱的填充,；
②徑向加壓法；
③軸向加壓法,，主要用于裝填大直徑柱,；
④干法，柱填充的技術(shù)性強(qiáng),，大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室使用己填充好的商品柱,。
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