細(xì)胞培養(yǎng)板的選擇使用

細(xì)胞培養(yǎng)板作為培養(yǎng)細(xì)胞的一種常用和重要的工具,，形狀,、規(guī)格、用途多樣,。

你是否也為如何選擇適合的培養(yǎng)板而迷茫,？

你是否正為如何方便、正確使用培養(yǎng)板而苦惱？

你對如何處理培養(yǎng)板是否也有困惑,？

對不同的培養(yǎng)板各有什么妙用你又有何體會,？

培養(yǎng)板的選擇

1）細(xì)胞培養(yǎng)板依底部形狀的不同可分為平底和圓底（U型和V型）；

2）培養(yǎng)孔的孔數(shù)有6,、12,、24、48,、96,、384、1536 孔等,；

3）根據(jù)材質(zhì)的不同有Terasaki板和普通細(xì)胞培養(yǎng)板,。具體選擇時根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞的類型、所需培養(yǎng)體積及不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ā?/span>

平底和圓底（U型和V型）培養(yǎng)板的區(qū)別和選擇

1）貼壁細(xì)胞一般用平底培養(yǎng)板,。

2）懸浮型細(xì)胞的培養(yǎng)一般用V型。

3）U型培養(yǎng)板亦多用于培養(yǎng)懸浮型細(xì)胞 ,。

4）V型培養(yǎng)板有時用做免疫學(xué)血凝集的實(shí)驗(yàn),。

不同型狀的板子自然有不同用途

平底的什么類型的細(xì)胞都可用，但當(dāng)細(xì)胞數(shù)目較少,，如做克隆時,，就用96孔平底板。

另外﹐做MTT等實(shí)驗(yàn)時﹐無論貼壁和懸浮細(xì)胞﹐一般均用平底板,。

至于U或V型板﹐一般在某些特殊要求時才使用,。如在免疫學(xué)方面﹐當(dāng)做兩種不同淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)時﹐需要二者相互接觸以刺激。因此﹐一般需要U型板﹐因細(xì)胞會由于重力的作用而聚集在一個很小的范圍內(nèi),，V型板的用途更少﹐一般用于細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)時﹐為了使效靶細(xì)胞緊密接觸﹐常使用V型板﹐但這種實(shí)驗(yàn)也可用U型板替代(加入細(xì)胞后﹐低速離心）,。

如果是養(yǎng)細(xì)胞的話， 通常是運(yùn)用平底的,， 另外要特別注意材質(zhì),， 標(biāo)示"Tissue Culture (TC) Treated"就是養(yǎng)細(xì)胞用的。

圓底的通常是拿來做分析,， 化學(xué)反應(yīng),， 或是保存樣品用。因?yàn)閳A底比較好將液體吸得干凈,， 如果用平底的就不好吸了,。 不過， 如果你是要測吸光值的話,， 一定要買平底的才行,。

大部分細(xì)胞培養(yǎng)都用平底培養(yǎng)板，便于鏡下觀測、有明確的底面積,、細(xì)胞培養(yǎng)液面高度相對一致,，還便于MTT檢測。

圓底培養(yǎng)板主要用于同位素?fù)饺氲膶?shí)驗(yàn),，需要用細(xì)胞收集儀收集細(xì)胞的培養(yǎng),，如“混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)”等。

問題集錦

問：我看到培養(yǎng)板有4,、6,、12、24,、48,、96孔幾種規(guī)格 ，但不知道到底什么實(shí)驗(yàn)用哪種規(guī)格,，請指教,。

答：要根據(jù)你具體的實(shí)驗(yàn)要求，流式一般用6孔,，MTT一般用96孔,，細(xì)胞爬片一般用24孔等！要具體根據(jù)你實(shí)驗(yàn)來定,！

問：請問哪位高手知道Terasaki板是什么培養(yǎng)板,，與普通細(xì)胞培養(yǎng)板有什么區(qū)別？謝謝??！

答：Terasaki plate主要是用于晶體學(xué)研究，產(chǎn)品設(shè)計(jì)便于對晶體的觀察與結(jié)構(gòu)分析,。

有兩種sitting 和handing drop兩種方法,，兩種方法應(yīng)用產(chǎn)品的外形結(jié)構(gòu)也不同。

材料上選擇crystal class polymer ,，特殊的材料有利觀察晶體結(jié)構(gòu),。

細(xì)胞培養(yǎng)板主要是PS材料。材料是treated sufface,。便于細(xì)胞貼壁生長與伸展,。當(dāng)然還有浮游細(xì)胞的生長材料，同時還有l(wèi)ow binding surface,，有關(guān)更多實(shí)驗(yàn)材料上的應(yīng)用與對材料的選擇,。

問：我想測吸光度用酶標(biāo)儀，用多孔細(xì)胞培養(yǎng)板行嗎,？請問酶標(biāo)板 多孔細(xì)胞培養(yǎng)板有什么區(qū)別,？

答：用多空細(xì)胞培養(yǎng)板測吸光度肯定可以拉,，我們經(jīng)常用它來做樣品的蛋白定量和MTT檢測。

區(qū)別：酶標(biāo)板一般要比細(xì)胞培養(yǎng)板貴,，細(xì)胞板主要做細(xì)胞培養(yǎng),，但也可以用來測蛋白濃度；酶標(biāo)板包括包被板和反應(yīng)板,，一般不能用做細(xì)胞培養(yǎng),，它主要做免疫酶聯(lián)反應(yīng)后的蛋白檢測，它需要更高的要求還需要特定的酶標(biāo)工作液,。

如下是個用酶標(biāo)板檢測冠狀病毒IgM/IgG抗體例子

【操作步驟】

1．加樣品：將標(biāo)本稀釋液100ul（或2滴）加到包被板內(nèi)（預(yù)留陰陽性及空白對照2－5孔）,，將待檢血清用PBS或生理鹽水按1：20稀釋后取10ul加入反應(yīng)孔內(nèi)。

2．加對照：加入陰性對照1－3孔,，陽性對照1孔,，各100ul對照血清?？瞻讓φ?孔空置,。

3．溫育：將反應(yīng)板震蕩使樣品混勻后，置37℃溫箱或水浴反應(yīng)20分鐘,。

4．洗板：用蒸餾水將濃縮洗滌液15ml稀釋至300ml,。（1）手洗：將反應(yīng)板孔內(nèi)容物傾出，將洗滌液注滿反應(yīng)孔,，放置30秒鐘后用力甩去，如此重復(fù)5次后拍干,。（2）機(jī)洗：5次,，每孔注入洗滌液200ul或注滿，停留30秒鐘后吸盡拍干,。

5．加酶標(biāo)工作液：每孔加入100ul（或2滴）酶標(biāo)工作液,，置37℃溫箱反應(yīng)20分鐘后，洗板5次,，洗板操作同步驟4,。

6．顯色和終止反應(yīng)：將底物A、B液各50ul（或1滴）加到反應(yīng)孔內(nèi),，37℃避光顯色10分鐘,。每孔加入終止液50ul（或1滴）混勻終止反應(yīng)。

【結(jié)果判定】

1．酶標(biāo)儀設(shè)定波長450nm,，先用空白調(diào)零,，然后測定各孔OD值；如果選用雙波長測定,，不必設(shè)置空白對照孔,。

2．當(dāng)陰性對照平均OD值小于0.08,，陽性對照（pc）OD值大于0.30時，說明試劑盒有效且實(shí)驗(yàn)操作正確,，否則應(yīng)當(dāng)重復(fù)試驗(yàn),。

3．臨界值（CUT—OFF VALUE）＝0.15＋陰性對照平均（NC）OD值（當(dāng)陰性平均OD值小于0.05時，按0.05計(jì)算,；當(dāng)陰性平均OD值大于或等于等于0.05時按實(shí)際值計(jì)算）,。

4．標(biāo)本OD值≤臨界值為陰性，標(biāo)本OD值>臨界值為陽性,。

常用不同培養(yǎng)板的孔底面積及推薦加液量：不同孔板所加培養(yǎng)液的液面都不宜太深,，一般在2-3mm范圍，結(jié)合不同孔的底面積就可算出各培養(yǎng)孔的適宜加液量,。若加液量過多會影響氣體（氧氣）交換,，而且在搬動過程中易溢出造成污染。具體所加細(xì)胞密度依實(shí)驗(yàn)的目的不同靈活掌握,。

細(xì)胞培養(yǎng)板的選擇使用  

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