超微量分光光度計(jì)是利用分光光度法對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器，常用于核酸,，蛋白定量以及細(xì)菌生長濃度的定量。無論在物理學(xué),、化學(xué),、生物學(xué)、 醫(yī)學(xué),、材料學(xué),、環(huán)境科學(xué)等科學(xué)研究領(lǐng)域 ,還是在化工、醫(yī)藥,、環(huán)境檢測(cè),、冶金等現(xiàn)代生產(chǎn)與管理部門 ,都有廣泛而重要的應(yīng)用。

1,、核酸的定量

核酸的定量是超微量分光光度計(jì)使用頻率最高的功能,。可以定量溶于緩沖液的寡核苷酸,，單鏈,、雙鏈DNA，以及RNA,。核酸的最高吸收峰的吸收波長260 nm,。每種核酸的分子構(gòu)成不一，因此其換算系數(shù)不同,。定量不同類型的核酸,，事先要選擇對(duì)應(yīng)的系數(shù)。測(cè)試后的吸光值經(jīng)過上述系數(shù)的換算,，從而得出相應(yīng)的樣品濃度,。
 

2、蛋白質(zhì)定量

1）直接定量：這種方法是在280nm波長，直接測(cè)試蛋白,。超微量分光光度計(jì)可以直接顯示出樣品的濃度,，或者是選擇相應(yīng)的換算方法，將吸光值轉(zhuǎn)換為樣品濃度,。由于緩沖液中存在一些雜質(zhì),，一般要消除320nm 的"背景"信息，設(shè)定此功能"開",。與測(cè)試核酸類似,，要求A280的吸光值大于0.1A，最佳的線性范圍在1.0-1.5 之間,。蛋白質(zhì)直接定量方法,，適合測(cè)試較純凈、成分相對(duì)單一的蛋白質(zhì),。紫外直接定量法相對(duì)于比色法來說,，速度快，操作簡單;但是容易受到平行物質(zhì)的干擾,，如DNA的干擾;另外敏感度低,，要求蛋白的濃度較高。

2）比色法蛋白質(zhì)定量（顏色反應(yīng)）

蛋白質(zhì)比色法測(cè)定的基礎(chǔ)是蛋白質(zhì)構(gòu)成成分:氨基酸與外加的顯色基團(tuán)或者染料反應(yīng),，產(chǎn)生有色物質(zhì),。有色物質(zhì)的濃度與蛋白質(zhì)反應(yīng)的氨基酸數(shù)目直接相關(guān)，從而反應(yīng)蛋白質(zhì)濃度,。

比色方法一般有BCA,，Bradford，Lowry 等幾種方法,。

由于各種方法反應(yīng)的基團(tuán)以及顯色基團(tuán)不一,，所以同時(shí)使用幾種方法對(duì)同一樣品得出的樣品濃度無可比性。所以在選擇比色法之前,，最好是參照要測(cè)試的樣本的化學(xué)構(gòu)成,，尋找化學(xué)構(gòu)成類似的標(biāo)準(zhǔn)蛋白作標(biāo)準(zhǔn)品。

3,、細(xì)菌細(xì)胞密度（OD600）
實(shí)驗(yàn)室確定細(xì)菌生長密度和生長期,，多根據(jù)經(jīng)驗(yàn)和目測(cè)推斷細(xì)菌的生長密度。在遇到要求較高的實(shí)驗(yàn),，需要采用分光光度計(jì)準(zhǔn)確測(cè)定細(xì)菌細(xì)胞密度,。通過檢測(cè)600nm處細(xì)胞生長培養(yǎng)的吸光度，從而監(jiān)測(cè)微生物或其他細(xì)胞培養(yǎng)的生長率,。OD600是追蹤液體培養(yǎng)物中微生物生長的標(biāo)準(zhǔn)方法,。實(shí)驗(yàn)中偶爾會(huì)出現(xiàn)菌液的OD值出現(xiàn)負(fù)值,，原因是采用了顯色的培養(yǎng)基，即細(xì)菌培養(yǎng)一段時(shí)間后,，與培養(yǎng)基反應(yīng),，發(fā)生變色反應(yīng)。