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一,、硅膠基質(zhì)填料
硅膠是HPLC填料普遍的基質(zhì),。除了具有無(wú)機(jī)物基質(zhì)共有的高強(qiáng)度，還提供了一個(gè)表面,，可以通過(guò)成熟的硅烷化技術(shù)鍵合范圍很廣的配基,，制成反相、離子交換,、疏水作用,、親水作用或分子排阻色譜。硅膠基質(zhì)填料適用廣泛的溶劑,，從極性到非極性,。其缺點(diǎn)是在水溶性堿性流動(dòng)相中不穩(wěn)定。通常,，硅膠基質(zhì)的填料推薦的常規(guī)分析pH范圍為2～8,。
1、正相色譜
正相色譜用的固定相通常為硅膠(Silica)以及其它具有極性官能團(tuán),如胺基團(tuán)(NH2,APS)和氰基團(tuán)(CN,CPS)的鍵合相填料,。由于硅膠表面的硅羥基(SiOH)或其它極性基團(tuán)極性較強(qiáng),，因此，分離的次序是依據(jù)樣品中各組份的極性大小,，即極性較弱的組份最先被沖洗出色譜柱,。正相色譜使用的流動(dòng)相極性相對(duì)比固定相低，如：正己烷(Hexane)、氯仿(Chloroform),、二氯甲烷(MethyleneChloride)等,。
2、反相色譜
反相色譜用的填料常是以硅膠為基質(zhì),，表面鍵合有極性相對(duì)較弱的官能團(tuán)的鍵合相,。反相色譜所使用的流動(dòng)相極性較強(qiáng)，通常為水,、緩沖液與甲醇,、乙腈等的混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)的組份最先被沖洗出,，而極性弱的組份會(huì)在色譜柱上有更強(qiáng)的保留,。
常用的反相填料有：C18(ODS)、C8(MOS),、C4(Butyl),、C6H5(Phenyl)等。
二,、聚合物填料
聚合物填料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂等,，其優(yōu)點(diǎn)是在PH值為1～14均可使用。相對(duì)于硅膠基質(zhì)的C18填料,，這類填料具有較強(qiáng)的疏水性,，而且大孔的聚合物對(duì)蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效。其缺點(diǎn)是相對(duì)硅膠基質(zhì)填料,，色譜柱柱效較低,。
三、其它無(wú)機(jī)填料
其它HPLC的無(wú)機(jī)填料色譜柱也已經(jīng)商品化由于其特殊的性質(zhì),，一般僅限于特殊的用途,。如，石墨化碳黑正逐漸成為反向色譜柱填料,。這種填料的分離不同于硅膠基質(zhì)烷基鍵合相,，石墨化碳的表面即是保留的基礎(chǔ)，不再需其它的表面改性,。該柱填料一般比烷基鍵合相硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強(qiáng),。石墨化碳可用于分離某些幾何異構(gòu)體，由于在HPLC流動(dòng)相中不會(huì)被溶解,，這類柱可在任何PH與溫度下使用,。氧化鋁也可以用于HPLC。氧化鋁微粒剛性強(qiáng),，可制成穩(wěn)定的色譜柱柱床,，其優(yōu)點(diǎn)是可以在pH高達(dá)12的流動(dòng)相中使用,。但由于氧化鋁與堿性化合物的作用也很強(qiáng)，應(yīng)用范圍受到一定限制,，所以未能廣泛應(yīng)用,。新型色譜氧化鋯基質(zhì)填料也可用于HPLC。商品化的只有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱,，應(yīng)用pH1～14,，溫度可達(dá)100℃。
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