手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號(hào)：chem17
掃碼關(guān)注視頻號(hào)
國(guó)產(chǎn)超濾離心管如何使用,？
國(guó)產(chǎn)超濾離心管如何使用？
【問(wèn)】：超濾離心管想重復(fù)使用,，請(qǐng)問(wèn)如何清洗和保存,？
最近使用超濾管，由于管子較貴,，想重復(fù)用幾次,，但找不到可靠的資料。不知如何清洗和保存,，比如有人說(shuō)用DIE氮化鈉,，有人說(shuō)用氫氧化鈉，有人說(shuō)用乙醇浸泡,。莫衷一是,。很急用。
【回答精要】
使用后用0.1M NaOH泡24h,，然后20%乙醇浸泡保存,。
這個(gè)我是聽(tīng)老板們說(shuō)的，的確乙醇泡完后孔徑會(huì)增大,，基本就是5-10KD,，也就是說(shuō)如果你的蛋白在21KD以上，應(yīng)該沒(méi)問(wèn)題,?；蛘呖梢圆挥靡掖寂荩肗aOH洗之后直接用無(wú)菌水保存,，每周換一下液體,，應(yīng)該沒(méi)有問(wèn)題。
看看說(shuō)明書(shū)不就結(jié)了,！我原來(lái)在CRO的時(shí)候一直是重復(fù)用的,，也沒(méi)見(jiàn)什么不好啊！短期會(huì)用的話,，用20%的乙醇泡著,，回頭拼命用millipore（其他可以替換的水也可以）的水充干凈，然后在用樣品緩沖液平衡一下就好,，至于有些人說(shuō)的改變孔徑,，也沒(méi)那么大影響的，你至少跟目的蛋白分子量差別3倍的截留分子量才安全的不是嗎?1個(gè)月以?xún)?nèi)不用的話,，建議用100mM的NaOH保存,！更長(zhǎng)時(shí)間的話加0.02%的疊氮鈉，但那個(gè)東西強(qiáng)致癌物,，不建議使用,。
理論上截留目標(biāo)物，孔徑應(yīng)選1/3~1/5的膜,；透過(guò)目標(biāo)物,，孔徑應(yīng)選5-10倍的膜。
【問(wèn)】準(zhǔn)備用超濾離心管從細(xì)胞培養(yǎng)上清液中濃縮蛋白,，在園子里找到一些關(guān)于濃縮蛋白的一些帖子,，但還有些問(wèn)題還是向園子里的大蝦請(qǐng)教一下。我們定的是Amicon Ultra 15ml（其他如果確定可以替換的也可以）規(guī)格的管子,，不知道有沒(méi)有誰(shuí)以前做過(guò)的,，有關(guān)于轉(zhuǎn)速，時(shí)間給一些建議,，另外細(xì)胞上清液離心前是否需要什么預(yù)處理,？離心之后回收蛋白時(shí)怎么盡量減少損失？如果要把管子重復(fù)利用,，NaoH清洗后,，如何在20%的乙醇中保存？是將其浸到乙醇中防于4度,，還是在管子中灌入乙醇？
【回答精要】
我用過(guò)5ml的管子,，當(dāng)時(shí)使用的轉(zhuǎn)速是4000rpm 8min,，可以把5ml的樣品液濃縮到約200ul，這僅供參考,，具體情況還要由您的樣品決定,。
我保存5ml管子的方法是把內(nèi)管取出，浸泡于裝有20％乙醇的燒杯中,。四度保存,。
該種管子可以脫鹽濃縮但不宜根據(jù)截留半徑做分離蛋白用。
我用的是3500g，4度離心,，時(shí)間可以自己控制,，取決于你最終的濃縮體積，我一般是200ul左右,。
千萬(wàn)別一下離心時(shí)間太長(zhǎng),，不同的蛋白濃縮的速度不同，有的需要長(zhǎng)時(shí)間離心,，有的則一下子就好,。當(dāng)然也和你的蛋白是否比較純，所用的是什么buffer,，還有蛋白的濃度有關(guān)系,。所以離心時(shí)要先短些時(shí)間觀察一下你的濃縮速度，不要一下子濃縮過(guò)了,，甚至形成沉淀就得不償失了,。
另外其實(shí)他們的管子都設(shè)計(jì)的是一次性使用，所以如果想重復(fù)使用,，不要離得速度太高,，4000－4500RPM就差不多了，另外重復(fù)使用時(shí)要看看管壁上有沒(méi)有裂紋,，現(xiàn)在的管子好像不如從前的結(jié)實(shí)了,。
用后把管子用純水洗干凈，離心少時(shí),，洗一下膜,，再象propeg主任說(shuō)的那樣收起來(lái)即可。使用多次后若覺(jué)得有些堵,，就可以用NaOH泡泡,，離心幾分鐘，應(yīng)該會(huì)有改善,。
純化多肽,，截?cái)喾肿恿靠梢赃x10倍，純化球蛋白,，截?cái)喾肿恿靠梢赃x3倍,，如管子要重復(fù)使用，轉(zhuǎn)速設(shè)轉(zhuǎn)速（G）的80％左右,，不然時(shí)間長(zhǎng)了塑料就裂了,，膜也容易出問(wèn)題。
離心后管子用MilliQ水清洗干凈,，浸泡在水中,，4度保存就行了，不放心就放點(diǎn)防腐劑，但是這個(gè)管今后只能用來(lái)離心同類(lèi)的樣品哦,。
超濾損失蛋白是正常的,，樣品體積大就分批離心，別搞的離心時(shí)間太長(zhǎng),，樣品里的雜質(zhì)如果可能盡量在離心前去除一些,。
杭州柏納科技?xì)g迎您
華東區(qū)實(shí)驗(yàn)室專(zhuān)業(yè)儀器設(shè)備集成供應(yīng)商
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來(lái)源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載,、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,，并注明“來(lái)源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任,。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來(lái)源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息,，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé),，不承擔(dān)此類(lèi)作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體,、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來(lái)源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任,。
- 如涉及作品內(nèi)容,、版權(quán)等問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利,。
采購(gòu)中心