抗體問(wèn)題一直困擾著廣大科研工作者，抗體市場(chǎng)魚(yú)龍混雜,，雖然是一個(gè)名字但是每個(gè)對(duì)應(yīng)的質(zhì)量都是不同的,，今天給大家分享一些抗體選擇的經(jīng)驗(yàn)~ 檢測(cè)任何目的靶蛋白都不止一種抗體可供選擇，為縮小抗體的選擇范圍選中合適的抗體,，需要考慮如下幾種因素：

1,、分析或應(yīng)用的類(lèi)型

一般抗體說(shuō)明書(shū)都列出該抗體經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證過(guò)適用于何種分析類(lèi)型,，如：可以應(yīng)用于 WB IHC ICC ELASA 分析等,，如果抗體說(shuō)明書(shū)沒(méi)有提及的應(yīng)用類(lèi)型,，并不意味著該抗體不適用于此種分析應(yīng)用類(lèi)型，而僅是說(shuō)明尚未經(jīng)過(guò)此種分析試驗(yàn)驗(yàn)證,，如果抗體不適用某些分析試驗(yàn),，則會(huì)在抗體說(shuō)明書(shū)上標(biāo)注出來(lái)不適于某分析試驗(yàn)。

2,、樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)

了解樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)有助于挑選最適宜的抗體,，至少兩方面要素需求考慮待測(cè)樣本蛋白的結(jié)構(gòu)域：抗體是由各種不同免疫原免疫宿主而制備得來(lái)，其間的免疫原包含：全長(zhǎng)蛋白,、蛋白片斷,、多肽、全有機(jī)體或細(xì)胞,，抗體闡明書(shū)一般都有免疫原的描述,，假如計(jì)劃?rùn)z測(cè)的是蛋白片斷或一種特別的同型物或蛋白全長(zhǎng)的某一區(qū)域，則有必要挑選用含此片段域的免疫原制備出的抗體,。假如計(jì)劃用 FACS 流式檢測(cè)活細(xì)胞的外表蛋白,，則需求挑選含該外表蛋白的胞外域來(lái)免疫制備的抗體。

樣本的提取或處理過(guò)程：某些抗體要求樣本經(jīng)過(guò)某些特別處理,，例如：許多抗體只辨認(rèn)復(fù)原和變性的,、表位已暴露不受二級(jí)四級(jí)結(jié)構(gòu)阻止的蛋白樣本，另一方面,，某些抗體僅辨認(rèn)天然折疊狀態(tài)的蛋白,。當(dāng)挑選免疫組化的抗體時(shí)，應(yīng)留意某些抗體只辨認(rèn)未固定的冷凍的安排,，而另一些抗體則適用于無(wú)需抗原修正的甲醛固定石蠟包埋的安排,，這些都會(huì)在抗體闡明書(shū)上運(yùn)用部分標(biāo)明出來(lái)。

3,、樣本的物種

應(yīng)挑選物種相同或有交叉反響的抗體,，抗體可能與不同物種的同種靶蛋白有交叉反響，因其氨基酸序列同源性較高,，假如樣本的品種未列入抗體闡明書(shū)上的交叉反響種屬表中,，并不意味著該抗體不適用于檢測(cè)該物種的蛋白，而只是表示該物種沒(méi)有用此抗體檢測(cè)驗(yàn)證過(guò),，應(yīng)通過(guò)序列比對(duì)的辦法來(lái)預(yù)測(cè)交叉反響,，可運(yùn)用 Expasy 和 NCBI BLAST 來(lái)進(jìn)行不同物種蛋白同源性比對(duì)。

4,、抗體宿主的品種

一抗的挑選：
一般說(shuō)來(lái),，在運(yùn)用偶聯(lián)二抗結(jié)合無(wú)偶聯(lián)物的一抗時(shí),，一抗宿主動(dòng)物的物種挑選較為重要，對(duì)于免疫組化而言,，盡可能挑選與樣本不同種系物種的一抗,，從而避免二抗與樣本內(nèi)源性免疫球蛋白產(chǎn)生交叉反響，例如：檢測(cè)小鼠樣本蛋白,，則不應(yīng)挑選小鼠或大鼠源的一抗,，選兔源的一抗，則二抗則可挑選偶聯(lián)了檢測(cè)分子的抗兔 IgG,。

假如挑選有偶聯(lián)物的一抗則不適用上述情況,，除免疫組化外的其它對(duì)不含內(nèi)源性免疫球蛋白樣本的檢測(cè)辦法，則抗體宿主物種的影響不大,，如對(duì)不含 IgG 的細(xì)胞裂解物樣本的 western blotting 檢測(cè),，盡管如此，含有血清的安排裂解物和安排培養(yǎng)上清中含有免疫球蛋白,，復(fù)原變性樣本中含IgG,，在western blot 檢測(cè)中則結(jié)合呈現(xiàn) IgG 分子50 and 25 kDa 的重鏈和輕鏈條帶。

二抗的挑選：
二抗應(yīng)選用與運(yùn)用的一抗相同的物種來(lái)源,，例如：假如你的一抗是小鼠的單克隆抗體,，二抗則選抗小鼠的二抗 anti-mouse secondary 。建議檢查二抗闡明書(shū)保證該抗體適用于你的檢測(cè)運(yùn)用,， 二抗一般連接熒光素 FITC 或發(fā)光團(tuán),。

兩層染色抗體的挑選：
兩層染色抗體的挑選用未偶聯(lián)一抗進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)物或安排切片的兩層免疫染色要求一抗來(lái)源于不同物種而且二抗分別辨認(rèn)其間之一，二抗闡明書(shū)應(yīng)描述其與其它物種來(lái)源的免疫球蛋有否有交叉吸附,。

5,、熒光和化學(xué)發(fā)光標(biāo)記

連接于二抗的標(biāo)記物是為了檢測(cè)抗體的結(jié)合，選擇標(biāo)記物依賴(lài)于幾個(gè)參數(shù)：檢測(cè)方法：熒光或著色沉淀,，熒光標(biāo)記物用特殊波長(zhǎng)的光激發(fā)時(shí)發(fā)射出可見(jiàn)光,，下表列出了幾種熒光素的分子特征：

挑選抗體的方法小編已經(jīng)告訴大家了,，不可錯(cuò)過(guò)哦~