液相色譜流動相使用注意 

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 流動相溶劑的選擇

　　1.所選用的流動相溶劑要有一定的化學(xué)穩(wěn)定性,，不與固定相和樣品組分起反應(yīng),，其純度和化學(xué)特性必須滿足色譜過程的穩(wěn)定性和重復(fù)性的要求,。

　　2.溶劑應(yīng)當(dāng)不干擾檢測器的工作,，溶劑應(yīng)與檢測器匹配,，選擇不影響檢測器正常工作應(yīng)選擇在測定波長范圍內(nèi)無吸收的流動相。

　　3.在制備分離中, 溶劑應(yīng)當(dāng)易于除去, 不干擾對分離組分的回收。

　　4.溶劑的粘度要小,，保證合適的柱壓降。

　　5.從實用角度考慮,，溶劑應(yīng)當(dāng)價格低廉，容易購得,，使用安全,，純度要高。

二,、流動相溶劑使用的注意事項

　　1.流動相溶劑應(yīng)選擇HPLC的溶劑或依此為標(biāo)準(zhǔn)的溶劑,。流動相使用前用0.45μm濾膜過濾、脫氣,，清除微粒和灰塵,。在送液泵內(nèi)，為了防止雜物（固體）進(jìn)入流路,，裝有吸濾器,，但網(wǎng)孔徑為10μm，比此更小的顆粒仍然可通過,，這會導(dǎo)致流路和柱子堵塞和污染,。為此，建議常用0.45μm濾膜過濾,。流動相溶劑須經(jīng)脫氣,，如不脫氣，在溶劑混合時,，或壓力溫度變化時容易產(chǎn)生大量氣泡,，會導(dǎo)致泵誤動作和輸液不暢，檢測器產(chǎn)生噪聲信號等,。

　　2.流動相恢復(fù)到室溫后使用,。流動相溫度與室溫相差時，流動相在恢復(fù)到室溫前,，基線水平很難穩(wěn)定,，特別是發(fā)生漂移，也容易產(chǎn)生氣泡等現(xiàn)象,。水與有機(jī)溶劑混合時,，混合液變化大，往往會與室溫相差很大,，務(wù)必注意,。

　　3.做HPLC流動相的試劑應(yīng)用HPLC級的、水應(yīng)用二次蒸餾水,，水相流動相需經(jīng)常更換,，防止長菌變質(zhì),。使用去離子水、針劑水,、純凈水（炊用）并不合適,、尤其是做梯度洗脫時，水中的不純物會成為鬼峰,，從而干擾分析結(jié)果,。

　　4.流動相的pH值過高或過低，流動相使用純水,，使用高濃度磷酸鹽緩沖溶液,，使用離子對試劑等，均可能造成色譜柱填料被化學(xué)破壞,，這種對色譜柱固定相及鍵合相的破壞通常是不可修復(fù)的

　　5.用緩沖鹽做流動相時,，在使用前和使用后都要用水清洗流路，絕對禁止將緩沖溶液留在流路中靜置過夜或更長時間,。

　　6.若需要使用含鹽的流動相,，使用前請務(wù)必guo濾。并且使用該含鹽流動相前,，色譜柱需先用低比例有機(jī)相（有機(jī)相含量應(yīng)不低于10%）的溶液沖洗,，以免緩沖鹽析出。流動相若為蒸餾水或含鹽的緩沖液,，建議現(xiàn)用現(xiàn)配,，以免流動相因滋生微生物而造成柱填料的污染。

　　7.進(jìn)行梯度實驗時要注意梯度變化過程中流動相的互溶性,，避免因流動相不互溶而導(dǎo)致的緩沖鹽析出問題,。反相系統(tǒng)更換正相系統(tǒng)或正相系統(tǒng)更換反相系統(tǒng)時，用異丙醇置換系統(tǒng)內(nèi)的儲存流動相后在接柱子,。

　　8.在更換兩種互不相溶的流動相時,，中間要用異丙醇溶液清洗過渡。例如：先用甲醇水做流動相,，然后在用正己烷做流動相時,，一定要先用異丙醇溶液沖洗甲醇水，然后用正己烷沖洗異丙醇,，反之也是一樣,。在更換流動相時還要考慮色譜柱是否更換。

　　9.儀器在短期（兩三天）不用時,，流路中可以是甲醇或水,。儀器在長期不用時，流路中應(yīng)用甲醇。

　　10.對于UV等檢測器用于高靈敏度檢測時,，要使用UV吸收性小的HPLC的溶劑作為流動相溶劑,，如甲醇、乙腈等,。

　　11.當(dāng)流動相溶劑為乙腈時,，流速為1ml/min泵的正常壓力5～7Mpa之間，如果壓力逐漸降低,，基線也出現(xiàn)異常,。這是由于乙氰的粘性大，導(dǎo)致泵的流速降低,。可適當(dāng)提高流速使泵的壓力恢復(fù)正常即可,。

　　12.流動相含有濃硫酸,、濃硝酸、二氯甲烷,、氯仿,、丙酮、四氯呋南,、二甲化砜等溶劑,，會對流路中的PEEK樹脂管路強(qiáng)度變成差、PEEK樹脂管容易破裂使溶劑外濺,。流動相含有鹵素離子的溶劑,，如KCI、NaCI,、NH4CI等,。對流路中的不銹鋼材料有腐蝕作用，以上的溶劑須盡量避免使用,。非用不可時,，分析完了后，應(yīng)立刻用蒸餾水把全流路清洗干凈,。

　　13.用于檢定梯度等性能時,，短時間使用在0.5%以下的低濃度丙酮水溶液是沒有問題的。

　　14.注意：稀硝酸與甲醇不能混合,，否則有可能會引起爆炸,。

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