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一,、背景
神經(jīng)元原代培養(yǎng)是將胚胎哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的部分組織,，如大腦皮層,、海馬、脊髓等腦組織直接取出,，再接種培養(yǎng)的方法,。目前國內(nèi),、外有關(guān)神經(jīng)元培養(yǎng)的方法較多,，但在原代培養(yǎng)中神經(jīng)元的純度和產(chǎn)量方面還存在一些急待解決的問題,。由于神經(jīng)元是一種高度分化的細胞，相對于其它細胞而言,，神經(jīng)元在體外更難以存活和生長,。因此，體外培養(yǎng)神經(jīng)元要求的培養(yǎng)方法和營養(yǎng)條件均較為特殊。
神經(jīng)細胞的體外培養(yǎng)技術(shù)是研究神經(jīng)源性疾病的發(fā)病機制,、進程的一個重要工具,，能很好的、直觀的反映離體神經(jīng)元的發(fā)育狀況和生理活性,，如何建立一個穩(wěn)定成熟的神經(jīng)細胞培養(yǎng)體系是神經(jīng)系統(tǒng)疾病體外實驗研究順利進行的基礎(chǔ),。隨著基礎(chǔ)醫(yī)學及臨床醫(yī)學研究的逐漸深入，神經(jīng)細胞的體外培養(yǎng)技術(shù)在腦損傷,、神經(jīng)障礙性疾病、衰老相關(guān)神經(jīng)疾病方面得到廣泛重視和普及應(yīng)用,。
二,、實驗步驟
(1)75% (體積分數(shù))酒精消毒孕鼠,在無菌條件下取出胎鼠,分離并切取脊髓,置于冷的無鈣、鎂的HBSS液的平皿中( 下置冰袋),。
(2)解剖顯微鏡無菌條件下仔細剝離脊膜及血管,。
(3)用彈簧剪將脊髓剪成1cm3大小，消化液37℃消化15-20min,，每五分鐘振蕩一次,；
(4)去掉上清，加入終止液終止消化,，吹打10-15次,，不能有氣泡，收集上清,，剩余組織再消化一次,。
(5)4℃1000rpm離心10min，棄上清,，加入種植液1重懸,，培養(yǎng)箱內(nèi)差速貼壁30min；
(6)收集上清,，臺盼藍染色計數(shù),，按6*105cells/孔種入六孔板(種植液1)，37℃,，5%CO2,，95%飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
(7)培養(yǎng)第二天,，全換液更換為種植液2,；
(8)培養(yǎng)第四天，半量換液加入5uM的阿糖胞苷,，24h全量換液,；
(9)之后每周換液兩次。
1d 7d
伊萊博生物科技（上海）有限公司是一家專注于生命科學領(lǐng)域研究,，集生物技術(shù)和產(chǎn)品開發(fā),、技術(shù)咨詢,、技術(shù)服務(wù)、以及科研能力培訓(xùn)服務(wù)為一體的綜合型高科技企業(yè),。目前已建成并投入使用的實驗室面積近2800平方米,，包含基礎(chǔ)實驗平臺、組學實驗平臺以及動物實驗平臺,，基本能夠滿足科研課題研究的全流程,。
伊萊博生物擁有專業(yè)的技術(shù)支持和實驗操作人員團隊，核心成員來自中科院,、復(fù)旦,、交大、同濟等國內(nèi)重點高校及科研機構(gòu),，能夠提供前沿的,、完善的實驗技術(shù)咨詢與服務(wù)。
為了響應(yīng)國家大力發(fā)展基礎(chǔ)研究的號召,，推動實驗科學領(lǐng)域的進步,，伊萊博生物充分利用積累多年的科研資源優(yōu)勢，為廣大科研工作者提供實驗技術(shù)培訓(xùn)服務(wù),，從理論和實操兩個部分,，培養(yǎng)其科研思維以及解決問題的能力，為今后的科研工作奠定堅實的基礎(chǔ),。
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