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高效液相色譜法只要求樣品能制成溶液,，不受樣品揮發(fā)性的限制，流動相可選擇的范圍寬,，固定相的種類繁多,，因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì),。與試樣預(yù)處理技術(shù)相配合,，HPLC所達到的高分辨率和高靈敏度，使分離和同時測定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)成為可能,，能夠分離復(fù)雜相體中的微量成分,。隨著固定相的發(fā)展，有可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離HPLC成為解決生化分析問題的方法,。由于HPLC具有高分辨率,、高靈敏度、速度快,、色譜柱可反復(fù)利用，流出組分易收集等優(yōu)點,，因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué),、食品分析、醫(yī)藥研究,、環(huán)境分析,、無機分析等各種領(lǐng)域。高效液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個重要的發(fā)展方向,。液相色譜-質(zhì)譜連用技術(shù)受到普遍重視,，如分析氨基甲酸酯農(nóng)藥和多核芳烴等；液相色譜-紅外光譜連用也發(fā)展很快如在環(huán)境污染分析測定水中的烴類,，海水中的不揮發(fā)烴類,，使環(huán)境污染分析得到新的發(fā)展,。
液相色譜儀是利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異，對混合物進行先分離,，而后分析鑒定的儀器,。廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食品分析,、醫(yī)藥研究,、環(huán)境分析、無機分析等各種領(lǐng)域,。高效液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個重要的發(fā)展方向,。
液相色譜儀工作原理：統(tǒng)由儲液器、泵,、進樣器,、色譜柱、檢測器,、記錄儀等幾部分組成,。儲液器中液相色譜儀的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相,，被流動相載入色譜柱（固定相）內(nèi),，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對運動時,，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程,，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出,，通過檢測器時,，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來高效液相色譜儀主要有進樣系統(tǒng),、輸液系統(tǒng),、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),。
液相色譜儀如何使用：
1．檢查溶劑托盤托盤上的溶劑是否足量,，以溶劑液面超過過輸液管過濾頭5厘米以上為宜。
2．檢查輸液管內(nèi)部有否氣泡,，若有,，應(yīng)及時通過排液閥排出。
3．對溶劑（針對第1項看是否需要補充溶劑）和樣品進行處理,，過濾,，脫氣。
4．打開主機電源，依次打開檢測器,，泵A,，泵B，柱箱的電源
5．打開電腦,，開啟色譜工作站
6．先在工作站中開啟活塞泵,，以所需的流動相平衡系統(tǒng)（約需30min）
7．打開氘燈，等待系統(tǒng)基線走穩(wěn)
8．開始進樣檢測
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