蛋白濃縮和換Buffer通常使用的超濾管,，常用Millipore的Amicon-Ultra-15超濾管（MWCO10kD）,。也有其它型號的、不同體積大小和MWCO超濾管可選,，視目的蛋白的分子量與濃縮前體積,、濃縮目標體積而定,?？芍貜褪褂谩?/span>

1,、選擇合適的超濾管,，主要考慮MWCO和濃縮體積，通常應截留分子量不應大于目的蛋白分子量的1/3,，比如目的蛋白分子量為35kDa,，就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右,，則可以用截留分子量3kD的超濾管,。

2、新買來的超濾是干燥的,，使用前加入MilliQ水,，水量*過膜，冰浴或冰箱里預冷幾分鐘,。然后將水倒出,，即可加入蛋白液，加入的多少,，以不超過管頂的白線為準,。操作要輕，加入蛋白液前,，超濾管需要插在冰上預冷,。

3、平衡,。質量和重心二者都要達到平衡,。注意轉速和加速度不可太快，否則直接損壞超濾膜,。開始離心超濾（離心機預冷至4度）。膜與轉軸的方向根據說明書調整（角轉離心機的情況是膜與軸垂直）,。在實際使用中,，一般轉速開的比說明書里的要低，這樣可以延長離心管的使用壽命,。

4,、當濃縮到剩下1ml時，【取50ul國產Bradford溶液,，加入10ul流穿,，看有沒變藍色，以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了,，將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾,。要精確判斷是否漏管，用5mg/ml的BSA離心10min,，再取流穿,，跑蛋白膠或Bradford粗測】，繼續(xù)加入剩下的蛋白液濃縮（在冰上操作,，防止蛋白受熱）,，直到濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發(fā)生蛋白沉淀,，導致堵管,。若發(fā)生沉淀，要確定沉淀的具體原因,，是蛋白濃度過高還是Buffer不合適,；前者可用多根超濾管同時超濾，降低濃度的辦法解決,，后者的方法是換不同的Buffer,，直到蛋白不發(fā)生沉淀為止。

超濾管

5,、前面幾步用以濃縮蛋白,，如果要換Buffer，在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候,，輕輕加入新的Buffer（經0.22um超濾膜超濾）,，再濃縮至1ml左右，連續(xù)三次,，濃縮終體積根據需要的蛋白濃度而定,，一般不多于500ul，也有濃縮至200ul以內的情況,。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算,，三次達到1000倍以上，基本上可以達到換buffer的目的,。

6,、取出蛋白濃縮液的操作在冰上操作，用黃槍頭（200ul）取,，輕輕順著邊緣插入槍頭,，輕輕吹打、混勻蛋白液,，注意不要碰到超濾膜,，然后吸取濃縮液,，每次吸接近200ul，直到吸完,。管底剩下的一點濃縮液不必吸取,，否則難度太大，有可能損壞超濾膜,。加入MilliQ水到超濾管中,，沒過超濾膜，防止膜失水變干,。

離心超濾管

7,、以下是處理超濾管，重復利用超濾管的步驟,。

8,、倒出超濾管里的水，用milliQ水輕輕潤洗幾次,，【若管底有可見的蛋白沉淀,，可以先加入水，然后用槍頭吹打,，注意不要碰到膜,，吹打至沉淀懸起，然后倒掉,，不可用自來水猛沖】然后加入0.2M的NaOH溶液,，室溫放置20min，期間平衡超濾管,。再離心10min,。倒出殘留的NaOH溶液，將管芯浸入MilliQ水的燒杯(1或2L)中,放置幾個小時,再換新的水,放置幾個小時,，不斷稀釋NaOH濃度,。50ml管和蓋子用自來水洗，內壁再用MilliQ水洗干凈,。

9,、取出浸沒的管芯，加至接近滿的MilliQ水,，50ml管也加滿MilliQ水,，將管芯慢慢放入50ml

離心管，排出部分水,，然后蓋上蓋子，放4度保存,，直到下次使用,。一般來說,，按照上述步驟和注意事項，每根管用三四年不會壞,。

上海登寧科技有限公司產品包括各類濾紙,、濾膜、濾器以及輔助器材,，普遍應用于生命科學,，農業(yè)，藥物醫(yī)學,，化工,，食品，水質分析,，環(huán)境監(jiān)測等各個領域,，公司與各廠家建立了穩(wěn)定的合作關系，確保正貨的同時更可以滿足客戶對于便捷和實惠的需求,。