過(guò)柱方法和技巧

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一：柱子可以：加壓,，常壓，減壓 

壓力可以增加淋洗劑的流動(dòng)速度,，減少產(chǎn)品收集的時(shí)間,，但是會(huì)減低柱子的塔板數(shù)。所以其他條件相同的時(shí)候,，常壓柱,，但是時(shí)間也最長(zhǎng)，比如天然化合物的分離，一個(gè)柱子幾個(gè)月也是有的,。 

減壓柱能夠減少硅膠的使用量,，感覺(jué)能夠節(jié)省一半甚至多，但是由于大量的空氣通過(guò)硅膠會(huì)使溶劑揮發(fā)（有時(shí)在柱子外面有水汽凝結(jié)）,，以及有些比較易分解的東西可能得不到,，而且還必須同時(shí)使用水泵抽氣（很大的噪音,，而且時(shí)間長(zhǎng)）,。以前曾經(jīng)大量的過(guò)減壓柱，對(duì)它有比較深厚的感情,，但是自從嘗試了加壓后,，就幾乎再也沒(méi)動(dòng)過(guò)減壓的念頭了。 

加壓柱是一種比較好的方法,，與常壓柱類(lèi)似,，只不過(guò)外加壓力使淋洗劑走的快些。壓力的提供可以是壓縮空氣,，雙連球或者小氣泵（給魚(yú)缸供氣的就行）,。特別是在容易分解的樣品的分離中適用。壓力不可過(guò)大,，不然溶劑走的太快就會(huì)減低分離效果,。個(gè)人覺(jué)得加壓柱在普通的有機(jī)化合物的分離中是比較適用的。 

二：關(guān)于柱子的尺寸

應(yīng)該是粗長(zhǎng)的最好,。柱子長(zhǎng)了,，相應(yīng)的塔板數(shù)就高。柱子粗了,，上樣后樣品的原點(diǎn)就?。ǚ从吃谥由暇褪菢悠穼颖容^薄）,，這樣相對(duì)的減小了分離的難度,。試想如果柱子十厘米，而樣品就有二厘米,，那么分離的難度可想而知,，恐怕要用很低極性的溶劑慢慢沖了。而如果樣品層只有0.5厘米,，那么各組分就比較容易得到*分離了,。當(dāng)然采用粗大的柱子要犧牲比較多的硅膠和溶劑了，不過(guò)這些成本相對(duì)于產(chǎn)品來(lái)說(shuō)也許就不算什么了（有些不環(huán)保的說(shuō),，不過(guò)溶劑回收重蒸后也就減小了部分浪費(fèi)）,。 

 現(xiàn)在見(jiàn)到的柱子徑高比一般在1：5～10，書(shū)中寫(xiě)硅膠量是樣品量的30～40倍，具體的選擇要具體分析,。如果所需組分和雜質(zhì)分的比較開(kāi)（是指在所需組分rf在0.2～0.4,，雜質(zhì)相差0.1以上），就可以少用硅膠,，用小柱子（例如200毫克的樣品,，用2cm×20cm的柱子）；如果相差不到0.1,，就要加大柱子,，我覺(jué)得可以增加柱子的直徑，比如用3cm的,，也可以減小淋洗劑的極性等等,。

三：關(guān)于無(wú)水無(wú)氧柱 

 適用于對(duì)氧，水敏感,，易分解的產(chǎn)品,，可以濕柱，也可以干柱,。不過(guò)在樣品之前至少要用溶劑把柱子飽和一次,，因?yàn)槿軇┖凸枘z飽和時(shí)放出的熱量有可能是產(chǎn)品分解，畢竟要分離的是敏感的東東,，小心不為過(guò),。也是因?yàn)榉蛛x的東西比較敏感，所以接收瓶一定要用可密封的,，遵循schlenk操作,。至于是加壓、常壓,、減壓,，隨需而定。因?yàn)槭莝chlenk操作,，所以點(diǎn)板是個(gè)問(wèn)題,，如果樣品是顯色的，恭喜了,，不用點(diǎn)板,，直接看柱子上的色帶就行了。如果樣品無(wú)色,，只好準(zhǔn)備幾十個(gè)schlenk瓶,，一瓶一瓶的點(diǎn)，不過(guò)幾次之后就知道樣品在哪,，也就可以省些了,。像我以前過(guò)一根無(wú)水無(wú)氧柱,，需要六個(gè)schlenk，現(xiàn)在只一個(gè)就能把所要的全收集到,。

無(wú)水無(wú)氧柱中用的比較多的是用氧化鋁作固定相,。因?yàn)楣枘z中有大量的羥基裸露在外，很容易是樣品分解,，特別是金屬有機(jī)化合物和含磷化合物,。而氧化鋁可以做成堿性、中性和酸性的,，選擇余地比較大,，但是比硅膠要貴些。聽(tīng)說(shuō)有個(gè)方法,，就是用石英做柱子,，然后用HF254做固定相,，這樣在柱子外面用紫外燈一照就知道產(chǎn)品在哪里了,，沒(méi)有驗(yàn)證過(guò)。哪位做過(guò)可以提出來(lái)大家參詳參詳,。 

 四：關(guān)于濕法,、干法上樣 

 濕法省事，一般用淋洗劑溶解樣品,，也可以用二氯甲烷,、乙酸乙酯等，但溶劑越少越好,，不然溶劑就成了淋洗劑了,。很多樣品在上柱前是粘乎乎的，一般沒(méi)關(guān)系,?？墒怯械纳蠘雍笤诠枘z上又會(huì)析出，這一般都是比較大量的樣品才會(huì)出現(xiàn),，是因?yàn)楣枘z對(duì)樣品的吸附飽和,，而樣品本身又是比較好的固體才會(huì)發(fā)生，這就應(yīng)該先重結(jié)晶,，得到大部分的產(chǎn)品后再柱分,，如果不能重結(jié)晶，那就不管它了,，直接過(guò)就是了,，樣品隨著淋洗劑流動(dòng)會(huì)溶解的。   

有些樣品溶解性差,，能溶解的溶劑又不能上柱（比DMF,DMSO等,，會(huì)隨著溶劑一起走,，顯色是一個(gè)很長(zhǎng)的脫尾），這時(shí)就必須用干法上柱了,。樣品和硅膠的量有一種說(shuō)法是1：1,，我覺(jué)得是越少越好，但是要保證在旋干后,，不能看到明顯的固體顆粒（那說(shuō)明有的樣品沒(méi)有吸附在硅膠上）,。

五：溶劑的選擇 

當(dāng)然是便宜，安全,，環(huán)保的了,。所以大多選用石油醚，乙酸乙酯,。文獻(xiàn)中有寫(xiě)用正己烷的,，太貴了，除非特別需要不要用不然銀子嘩嘩的,，流的比淋洗劑還快,，不過(guò)因?yàn)闃O性很小，有時(shí)還是非它不可,。乙mi也可以用,，但是就是容易睡覺(jué)，注意保持清醒別讓溶劑流干了,，那樣柱子也就不爽了,。二氯甲烷也有用的，但是要知道,，它和硅膠的吸附是一個(gè)放熱過(guò)程,，所以夏天的時(shí)候經(jīng)常會(huì)在柱子里產(chǎn)生氣泡，天氣冷的時(shí)候會(huì)好一些,。甲醇據(jù)說(shuō)能溶解部分的硅膠,，所以產(chǎn)品如果想過(guò)元素分析的話(huà)要留神，應(yīng)該經(jīng)過(guò)后繼處理,，比如說(shuō)重結(jié)晶等,。其他的溶劑用的相對(duì)較少，要依個(gè)人的不同需要選擇了,。 

 由于某些原因,，用到的淋洗劑多是大包裝的（便宜嘛），我們這里是用10升或25升的塑料桶裝的,，就要注意這些工業(yè)品的純度是較低的,。經(jīng)常能夠從送來(lái)的大桶底部看見(jiàn)有色的雜質(zhì)，其他的雜質(zhì)就可想而知了,，所以在比較嚴(yán)格的柱分時(shí)就要對(duì)溶劑重蒸,。當(dāng)然過(guò)原料時(shí)就可以免去這一步了,，反正下面還有提純的方法。 

 另外溶劑在過(guò)柱子后最好也回收使用,，一方面環(huán)保,，另一方面也能節(jié)省部分經(jīng)費(fèi)，缺點(diǎn)是要消耗一定的人工,。這里要注意的是,，一般在過(guò)柱同時(shí)進(jìn)行的是減壓旋蒸，石油醚和乙酸乙酯的比例由于揮發(fā)度的不同會(huì)導(dǎo)性的變化,，一般會(huì)使得極性變大,，在梯度淋洗時(shí)比較合適，正好極性越來(lái)越大了,。在過(guò)完柱子后,，溶劑最后回收要采用常壓，因?yàn)樵跍p壓旋蒸時(shí)會(huì)有部分低沸點(diǎn)的雜質(zhì)一起出來(lái),，常壓時(shí)就會(huì)減少這種現(xiàn)象,，如果雜質(zhì)和你下面要過(guò)的樣品有反應(yīng)那就慘了。

六：關(guān)于操作問(wèn)題   

1,、 裝柱

柱子下面的活塞一定不要涂潤(rùn)滑劑,，會(huì)被淋洗劑帶到產(chǎn)品中的,，可以采用四氟節(jié)門(mén)的,。干法和濕法裝柱覺(jué)得沒(méi)什么區(qū)別，只要能把柱子裝實(shí)就行,。裝完的柱子應(yīng)該要適度的緊密（太密了淋洗劑走的太慢）,，一定要均勻（不然樣品就會(huì)從一側(cè)斜著下來(lái)）。書(shū)中寫(xiě)的都是不能見(jiàn)到氣泡,，我覺(jué)得在大多數(shù)情況下有些小氣泡沒(méi)太大的影響,，一加壓氣泡就全下來(lái)了。當(dāng)然如果你裝的柱子總是有氣泡就說(shuō)明需要多練習(xí)了,。但是柱子更忌諱的是開(kāi)裂,，甭管豎的還是橫的，都會(huì)影響分離效果,，甚至作廢,！ 

2、 加樣  

用少量的溶劑溶樣品加樣,，加完后將下面的活塞打開(kāi),，待溶劑層下降至石英砂面時(shí)，再加少量的低極性溶劑,，然后再打開(kāi)活塞,，如此兩三次,，一般石英砂就基本是白色的了。加入淋洗劑,，一開(kāi)始不要加壓,，等溶樣品的溶劑和樣品層有一段距離（2～4cm就夠了），再加壓,，這樣避免了溶劑（如二氯甲烷等）夾帶樣品快速下行,。  

3、 淋洗劑的選擇  

  感覺(jué)上要使所需點(diǎn)在rf0.2～0.3左右的比較好,。不要認(rèn)為在板上爬高了分的比較開(kāi),，過(guò)柱子就用那種極性，如果rf在0.6,，即使相差0.2也不容易在柱子上分開(kāi),，因?yàn)橹邮且粋€(gè)多次爬板的狀態(tài)，可以通過(guò)公式的比較：0.6/0.8一次的分離度,，肯定不如（0.2/0.3）的三次方或四次方大

4,、 樣品的收集  

用硅膠作固定相過(guò)柱子的原理是一個(gè)吸附與解吸的平衡。所以如果樣品與硅膠的吸附比較強(qiáng)的話(huà),，就不容易流出,。這樣就會(huì)發(fā)生，后面的點(diǎn)先出,，而前面的點(diǎn)后出,。這時(shí)可以采用氧化鋁作固定相。另外,，收集的試管大小要以樣品量而定,，特別是小量樣品，如果用大試管,，可能一根就收到了三個(gè)樣品,，wuwu。如果都用小試管那工作量又太大,。  

5,、最后的處理  

柱分后的產(chǎn)品，由于使用了大量的溶劑,，其中的雜質(zhì)也會(huì)累積到產(chǎn)品中,，所以如果想送分析，最好用少量的溶劑洗滌一下,，因?yàn)榇蟛糠值碾s質(zhì)是溶在溶劑里的,，一洗基本就沒(méi)了，必要時(shí)進(jìn)行重結(jié)晶,。 

另外,，再過(guò)柱的時(shí)候,，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)氣泡，一是和使用的溶劑有關(guān),，如果是易揮發(fā)的溶劑,，如、二氯甲烷等,，在室溫稍高的情況下,，很容易出現(xiàn)這種現(xiàn)象，因此,，在室溫高的時(shí)候,，可以選擇沸點(diǎn)較高，揮發(fā)相對(duì)小的溶劑,。還有,，使用混合溶劑時(shí)，使用的兩種溶劑的沸點(diǎn)應(yīng)該相差不大,，如：乙酸乙酯和石油醚(60~90) 

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