核苷酸是一類由嘌呤堿或嘧啶堿,、核糖或脫氧核糖以及磷酸三種物質(zhì)組成的化合物,，主要參與構(gòu)成核酸,，許多單核苷酸也具有多種重要的生物學(xué)功能，如與能量代謝有關(guān)的三磷酸腺苷（ATP）,、脫氫輔酶等,。核苷類藥物，包括其衍生物是一類重要的抗癌藥物,，也可作為抗病毒藥物來(lái)抑制病毒在人體內(nèi)的生長(zhǎng)繁殖,。這些化合物屬于大極性化合物，常規(guī)的反相色譜柱通常難以保留,。而使用HILIC色譜柱會(huì)遇到同分異構(gòu)體的挑戰(zhàn)從而無(wú)法分離,。

賽默飛黑科技

——Hypercarb 色譜柱

賽默飛黑科技——Hypercarb 色譜柱，填料為100%的多孔石墨化碳（PGC）,，球形全多孔顆粒,。碳原子排列成六邊形為骨架的多片層結(jié)構(gòu)，沒(méi)有任何其它的亞孔或鍵合相,?；谶@一特點(diǎn)，Hypercarb色譜柱具有不同于硅膠基質(zhì)固定相的*性質(zhì),。Hypercarb的表面具有空間選擇性,，可以分離幾何異構(gòu)體及其它結(jié)構(gòu)相近的化合物。Hypercarb對(duì)各種流動(dòng)相溶劑都表現(xiàn)出較好的穩(wěn)定性,，pH在1-14之間的流動(dòng)相皆可用于分離,，這使其可在一次運(yùn)行中對(duì)各種極性的化合物進(jìn)行分析?；?/font>Hypercarb*的疏水和電子云保留機(jī)理,，它非常適合解決HPLC及LC/MS反相和HILIC應(yīng)用中的“問(wèn)題”分離，能夠以超凡能力保留強(qiáng)極性化合物并分離結(jié)構(gòu)性質(zhì)接近的化合物,。

小編通過(guò)兩個(gè)案例分享,，采用Hypercarb色譜柱,，挑戰(zhàn)極性化合物保留分離，如同帶上開(kāi)掛神器,，在堿性流動(dòng)相條件下,，充分保留和分離核苷酸、阿糖胞苷及其含有同分異構(gòu)體的磷酸化衍生物,，對(duì)于其他類似結(jié)構(gòu)的極性化合物分離具有極大的參考意義,。

- No. -

01

Hypercarb用于5種核苷酸保留分離

儀器：Vanquish Duo UHPLC

色譜柱：Hypercarb，100x3mm,，3um（P/N 35003-103030）

流動(dòng)相：A：0.3%甲酸水,，用氨水調(diào)pH=9；B: 乙腈

流 速：0.8 mL/min

進(jìn)樣量：5 μL

檢測(cè)波長(zhǎng)：UV 254 nm

圖1  5種核苷酸分離效果

圖2 嬰幼兒配方全脂羊乳粉中核苷酸分離效果

圖3 5種核苷酸重復(fù)性譜圖（n=3）

使用Hypercarb色譜柱能有效分離全脂羊乳粉中5種核苷酸與其他雜質(zhì),，結(jié)果可靠,，可滿足實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)需求。圖3為5種核苷酸的重復(fù)性譜圖,，可以看到重復(fù)性良好,，保留時(shí)間和峰面積RSD均＜1%。

- No. -

02

Hypercarb用于阿糖胞苷及其磷酸化衍生物保留分離

儀器：Vanquish Duo UHPLC

色譜柱：Hypercarb,，100x3mm,，3um（P/N 35003-103030）

流動(dòng)相：A：己胺 (5mM) ，加入DEA (0.4%, v/v), 用冰醋酸調(diào)pH=10,；B: 乙腈/水 (1/1, v/v)

流 速：1 mL/min

進(jìn)樣量：20 μL

檢測(cè)波長(zhǎng)：UV 272 nm

圖4 7種阿糖胞苷類化合物分離

圖5 7種阿糖胞苷類化合物重復(fù)性譜圖（n=6）

使用Hypercarb色譜柱保留和分離阿糖胞苷及其磷酸化衍生物,，所有化合物均能基線分離，5號(hào)峰CTP與7號(hào)峰Ara-CTP這兩種非對(duì)映異構(gòu)體分離,。7種阿糖胞苷類化合物在Hypercarb色譜柱上連續(xù)6針進(jìn)樣,，重復(fù)性表現(xiàn)優(yōu)異，保留時(shí)間和峰面積RSD＜2%,。

本方案開(kāi)發(fā)基于LC-UV,，能夠分離頗具挑戰(zhàn)的非對(duì)應(yīng)異構(gòu)體CTP與Ara-CTP，對(duì)于有低濃度分析要求的實(shí)驗(yàn)室,，該方案可根據(jù)實(shí)際需求應(yīng)用于LCMSMS,。

今天的分享就到這里啦，大家是不是對(duì)Hypercarb保留分離極性化合物更有信心呢,？想要獲取更多信息,，歡迎掃描下方二維碼獲取應(yīng)用報(bào)告“Hypercarb色譜柱用于核苷酸類及其磷酸化衍生物的分析”，下期再會(huì),！

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