新的色譜柱柱活化沖洗技巧

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新的色譜柱柱活化沖洗技巧

方法/步驟

一、新的色譜柱活化：采用100%甲醇1ml/min沖洗60min,，再換成流動相進(jìn)行平衡,；如果流動相中含有緩沖鹽,，在換成流動相前,，請使用過渡流動相過渡后再換流動相平衡；

二,、日常維護(hù)

1,、建議檢測前樣品和流動相進(jìn)行過濾；

2,、建議每天做完樣品后及時進(jìn)行清洗,；

3、常規(guī)檢測

測試完后,，直接把色譜柱反向連接采用90%有機(jī)相沖洗45min,，最后保存在純甲醇或純乙腈中；

4,、使用緩沖鹽條件：

1）等度條件：使用緩沖鹽之前和之后都用過渡流動相以1ml/min流速沖洗45min,；

2）梯度條件：使用緩沖鹽之前與初始流動相組成相同的過渡流動相以1ml/min流速沖洗45min；

注意：過渡流動相是指有機(jī)相和水相比例與分析流動相相同比例,，只是不含有緩沖鹽,；

3）緩沖鹽沖洗干凈后，采用90%有機(jī)相反向沖洗60min,，最后保存在純有機(jī)溶劑中,；

注意：如果使用緩沖液不能存留色譜柱中過夜；

三,、色譜柱的保存

1. 短時間內(nèi)色譜柱的保存

  如果使用時間間隔不超過四天,，則色譜柱無需特別的維護(hù)，只需根據(jù)最后一次測試使用的流動相或樣品的性質(zhì),，在使用后用純甲醇,、純水或甲醇與水的混合溶液進(jìn)行淋洗，直至基線走平約半小時即可,。

 2. 長時間色譜柱的保存

如色譜柱長時間不用,，則最好將其從HPLC儀中取下保存,，取下前用合適的溶劑淋洗，洗去不適與保存色譜柱的洗脫液,，如C18反相柱可以用純甲醇或乙腈作為保存的介質(zhì),，然后用塑料塞頭將其塞緊，以免色譜柱內(nèi)*干燥,。

END

注意事項

色譜柱使用pH范圍在1.5～10.0,，通常建議使用范圍pH為2.0～8.0比較合適，流動相超出pH范圍將會導(dǎo) 致硅膠基質(zhì)流失和鍵合相斷裂使柱效下降,，使用壽命變短,，所以要嚴(yán)格控制pH范圍

                                                                                                                                           本篇轉(zhuǎn)載至實驗之家