一、接種骨髓間充質(zhì)干細胞

取對數(shù)生長期的細胞,，按照2×105cells/cm2的細胞密度接種至包被后的細胞培養(yǎng)皿中,，將接種好的細胞培養(yǎng)皿放到37℃,，5% CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)，定期觀察細胞增殖狀態(tài),，當細胞融合度達60-70%時,，棄掉上清，加入成骨誘導分化培養(yǎng)基,。

二,、細胞分化誘導

每2-3天進行換液（定期觀察是否有污染），再放入37℃,，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)約2-3周,，并注意觀察細胞形態(tài)變化。根據(jù)細胞鈣鹽結(jié)晶析出和鈣質(zhì)結(jié)節(jié)形成的情況,，決定終止細胞誘導的時間,，進行下一步染色鑒定。

三,、細胞固定

用吸頭（確保吸取充分）吸去培養(yǎng)基使用適量1×PBS清洗一次,，棄去后取適量4%中性甲醛溶液細胞培養(yǎng)皿底面，室溫固30-60min,，棄去固定液再使用1×PBS清洗兩次,。

四、茜素紅染色

加入適量茜素紅染液染3-5min,，吸去茜素紅染液,，用1×PBS清洗兩次，并加入適量1×PBS避免細胞干燥,。

五,、誘導評估

顯微鏡下觀察成骨染色效果，并進行圖像采集和誘導評估,。誘導成功時,，鈣質(zhì)結(jié)節(jié)會與茜素紅染料結(jié)合后呈現(xiàn)紅色或橘紅色。