β-Gal染色試劑盒 (組織專用)?

貨號：R0757

規(guī)格：100T

保存：-20℃,，避光，12 個月,。

簡介：?β

β-Gal染色試劑盒(組織專用)?(β-Galactosidase?Staining?Kit)是一種基于衰老時SA-β-Gal?(senescence-associated?β-galactosidase)活性水平上調(diào)而對衰老細胞或組織進行染色檢測的試劑盒,。在普通的光學(xué)顯微鏡下就可以觀測到細胞或組織的衰老情況,。絕大多數(shù)正常細胞被認為僅有有限的分裂能力，在不能分裂后就進入衰老狀態(tài),。此時細胞仍然是存活的,，但細胞的基因和蛋白的表達譜發(fā)生了很大改變。?

           β-Gal染色試劑盒(組織專用)?以X-Gal為底物,，在衰老特異性的β-半乳糖苷酶催化下會生成深藍色產(chǎn)物,，光學(xué)顯微鏡下很容易觀察到變成藍色的表達β-半乳糖苷酶的細胞或組織。本試劑盒僅染色衰老細胞,，對衰老前的細胞(presenescent?cells),、靜止期細胞(quiescent?cells),、永生細胞(immortal?cells)或腫瘤細胞等不會染色。對于組織切片或組織塊應(yīng)采用冰凍切片,，可以檢測的樣品數(shù)量視樣品的大小而定,，對于普通的切片按每片1ml可以檢測100個樣品

組成：

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自備材料：?

1、PBS或HBSS??

2,、2,、冷凍切片?

3、3,、顯微鏡??

操作步驟(僅供參考)：?

1. 對于組織切片或非常小的組織塊,，加入適當體積的β-Gal Fixative，染色固定液,，以充分蓋住組織為宜,，室溫固定不少于10分鐘。對于小的組織塊,，固定時間應(yīng)該適當延長,。
2. 用PBS洗滌組織3次，每次不少于5分鐘,。對于組織塊,，時間還要適當延長。
3. 吸除PBS,，每孔加入1毫升染色工作液,。染色工作液的配制參照下圖。
4. 37℃孵育20分鐘至2小時,，或更長時間,，直至部分細胞的顏色變藍。如果孵育時間較長,，可以用parafilm或保鮮膜封住放置組織的容器,，以防止蒸發(fā)。
5. 吸除染色工作液,，用PBS洗滌組織3次,，每次不少于5分鐘。對于組織塊,，時間還要相應(yīng)延長,。
6. 普通光學(xué)顯微鏡下觀察。如不能及時觀察,，可以去除染色工作液,，加入2毫升PBS，4℃可以保存數(shù)天。

方法參考下表比例：

說明：對于聚丙烯容器和聚苯乙烯容器的簡單的判定方法是：聚丙烯容器可以高溫高壓滅菌,；而聚苯乙烯容器不適合高溫高壓滅菌,，一旦高溫高壓處理就會嚴重變形。?4,、37℃孵育2h至過夜,，直至樣品顯藍色?？梢杂?/span>parafilm或保鮮膜封住防止蒸發(fā),，最好把整個切片浸泡在染色工作液中，應(yīng)注意37℃孵育不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進行,。?5,、普通光學(xué)顯微鏡下觀察。如不能及時觀察,，加上封片液封片后4℃可以保存較長時間,。?

注意事項：?

1、?β-Gal?Fixative有一定的腐蝕性和氣味,，操作時請注意防護。?

2,、?β-Gal?染色反應(yīng)依賴于特定的pH條件,，不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進行染色反 應(yīng)。用于細胞培養(yǎng)的二氧化碳培養(yǎng)箱中較高濃度的二氧化碳會影響染色工作液的pH值,，而導(dǎo)致染色失敗,。?

3、?配制染色工作液時需使用聚丙烯(polypropylene)容器或玻璃容器,，不宜使用聚苯乙烯 (polystyrene)容器,。但染色時可以在聚苯乙烯(polystyrene)容器中進行，例如普通的6孔板就可以用作染色的容器,。??

有效期：?12個月有效,。? ?