請遵守細胞污染永恒定律:無論什么細胞只要是不重要的細胞污染了,立刻加84棄之,重新復蘇新凍存管培養(yǎng);實在需要挽救的請參考以下:
細菌污染:主要有洋蔥霍爾伯德菌型污染
確定是非常珍貴的細胞 建議分別配置含10倍慶大霉素和兩性霉素溶液(G/A)的PBS和5倍慶大霉素和兩性霉素溶液(G/A)的*培養(yǎng)基各一份,。然后先用10倍雙抗的PBS洗滌細胞5-10次, 然后用5倍雙抗的*培養(yǎng)洗滌細胞3次以上,再加上含雙倍的G/A溶液放培養(yǎng)箱培養(yǎng),,一個小時后換液,,持續(xù)4個小時后,再加上正常培養(yǎng)細胞所需的抗生素,,過夜,,到最終確定細胞沒有任何污染物,因此時細胞受損過大,,建議優(yōu)化培養(yǎng)基方式(血清提高2%-5%)或者立即凍存細胞,,一個月后復蘇。
真菌污染:
污染的多是曲霉菌,,白色念珠菌,,酵母菌,黑霉菌,,孢子菌,,真菌主要以預防為主,防治為輔,,已經(jīng)污染了,,建議采用以下方法:
1. 細胞一旦污染,,很難挽救,,即使使用制霉菌素或放線菌素D,也是傷敵八千自損一萬的辦法,,可使用抗生素進行查殺,,但是高濃度的抗霉菌素對細胞有毒性作用。
2. 把所有細胞從污染的CO2孵箱轉移,,采用過氧乙酸擦洗孵箱(全部,,尤其四個角)。并把過氧乙酸放置在孵箱內一個小時,使其蒸汽彌漫,。待過氧乙酸的氣味消散后,,再移入細胞;
3. 用0.5%新潔爾滅擦拭超凈臺和墻壁,,確保不留死角,,地面用新潔爾滅消毒液拖地。
4. 將環(huán)境*消毒,,整個培養(yǎng)間高錳酸鉀或者乳酸熏蒸,孵箱內部包括托盤等全部用苯酚搽洗,封閉2天,。
真菌污染預防方法:
1),將細胞移出來,,用微量硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內,,再把水盤里加適量硫酸銅或者酸氫二鈉高鹽液體防止霉菌
2)孵箱應定期清潔,大約一個月左右清潔一次,,
3)可在培養(yǎng)基里加兩性霉素或制霉菌素)或[放線菌素D或雙抗進行預防,。
4)最主要的還是要培養(yǎng)良好的無菌觀念,實驗室盡量不要大聲說話,,佩戴好口罩,,手套,操作時應小心,,避免培養(yǎng)基撒入培養(yǎng)箱以及生物安全柜,,這些撒入培養(yǎng)箱的培養(yǎng)基為細菌及真菌的繁殖提供了很好的條件。
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