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談到實(shí)驗(yàn)中的紫外分光光度法,，大家更多關(guān)注的是紫外分光光度計(jì)的儀器性能等等，而往往忽略了比色皿,，但是您知道嗎,，小小的比色皿其實(shí)也有很多講究，而且對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響也很明顯,。小析姐總結(jié)了一些比色皿使用的注意事項(xiàng),，希望能對你有所幫助。
比色皿常識
比色皿(又名吸收池,，樣品池)用來裝參比液,、樣品液。配套在光譜分析儀器上,，如分光光度計(jì),，血線蛋白分析儀，粒度分析儀等,。比色皿是分光光度計(jì)的重要配件,，一般為長方體，其底及兩側(cè)為磨毛玻璃,，另兩面為光學(xué)玻璃制成的透光面粘結(jié)而成,。
比色皿的制造工藝有兩種,一種是粘合劑粘合而成,另一種是高溫熔融而成。比色皿的材料通常來源于石英,、熔凝硅石和光學(xué)玻璃,。常用比色皿的形狀有方形、矩形和圓筒形,容量一般為幾毫升,。也有用于少量試樣的微型或超微型毛細(xì)管皿,。另外還有高、低溫恒溫比色皿,。比色皿按照使用的波長范圍分為可見光系列(稱玻璃比色皿),，紫外可見光系列(稱石英比色皿),，紅外光系列(稱紅外石英比色皿)。
紫外光度實(shí)驗(yàn)中的比色皿通常使用玻璃比色皿和石英比色皿,，玻璃比色皿是用光學(xué)玻璃制成的比色皿,，只能用于可見光區(qū)，適用于330～1000nm波長范圍,，石英比色皿是用熔融石英(氧化硅)制成的比色皿,，既適用于紫外光區(qū)，也可用于可見光區(qū),，適用于200～400nm波長范圍,。
利用石英和玻璃比色皿在紫外光區(qū)和可見光區(qū)有無吸收的差異，在紫外光區(qū)時,，由于玻璃比色皿強(qiáng)烈吸收紫外光,，對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和結(jié)果有影響，石英比色皿不吸收紫外光,，不會影響數(shù)據(jù),，因此在紫外光區(qū)不使用玻璃比色皿而使用石英比色皿。而在可見光區(qū),，玻璃的影響非常小,，可忽略，和石英比色皿一樣均可以使用,，但考慮到節(jié)約經(jīng)濟(jì)的因素,，由于玻璃比色皿的價(jià)格遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于石英比色皿，通常選擇可見光區(qū)使用玻璃比色皿,，紫外光區(qū)使用石英比色皿,。
比色皿的鑒別
比色皿透光面是由能夠透過所使用的波長范圍的光的材料制成。在200-350nm工作的比色皿適用于紫外區(qū),，必須使用石英或熔熔硅石制成透光面的石英比色皿,。石英比色皿既可用于紫外區(qū)又可用于可見區(qū)，但是價(jià)格一般比較貴哦,，所以要根據(jù)使用波長選擇比色皿,，如果不用紫外區(qū)的話，用普通玻璃比色皿就行了,，一則浪費(fèi)沒必要,，二則，嘿嘿,，摔碎了也不心疼,，哈哈。而普通硅酸鹽光學(xué)玻璃制成的透光面的比色皿，只能用于350nm至1000nm的可見區(qū),。(好象還能到2000nm,，不過在這里不做討論了)。
1,、直觀法
通過視覺,、聽覺的不同感*法觀察和比較比色皿的外觀及澄清程度來進(jìn)行辨別。
(1)比色皿上通常會有字母標(biāo)識,，玻璃比色皿口沿處有“G”(Glass玻璃),，而石英比色皿口沿處有“Q”(Quartz石英)或者“QS/S”(QuartzGlass石英玻璃),。
(2)如果沒有字母標(biāo)識或者標(biāo)識已磨損,，可以在口沿處由上往下看，如果棱面發(fā)綠就是玻璃的,，透明或發(fā)白就是石英的,。更確切地說，普通玻璃的斷口是淺綠的,，硼酸玻璃的斷口是泛白的,，而石英的斷面是透明的。
(3)可以聽聲辨別,，石英敲擊的聲音比較清脆,，玻璃器皿敲擊時發(fā)出的聲音發(fā)悶。
(4)石英比玻璃的硬度大,，如果把兩個比色皿對磨,，石英比色皿磨損微小，而玻璃比色皿磨損比較大,。
(5)可用白熾燈照射,，透光度高的是玻璃比色皿，而石英比色皿里面應(yīng)當(dāng)稍渾濁,。
[注]:以上都是快速簡單的鑒別方法,，除非是光學(xué)專業(yè)人士，否則極易由于個人差異產(chǎn)生誤差,，一般情況只能作為權(quán)宜之法,。并且現(xiàn)在的制備工藝，無論是玻璃比色皿還是石英比色皿外觀都是澄清透明,，厚度,、質(zhì)量差別不大，因此僅通過這些感官的直觀鑒別方法在是不可取的,。
2,、機(jī)試法
使用紫外可見分光光度計(jì)來鑒別玻璃、石英比色皿和配對比色皿。
現(xiàn)行國家檢定規(guī)程規(guī)定石英比色皿在250nm下吸光度應(yīng)小于0.07abs,，若吸光度大于0.07abs則為玻璃比色皿,。
比色皿內(nèi)不放置任何樣品，以空氣為介質(zhì),，波長設(shè)置250nm,，調(diào)零。將比色皿放置在樣品道,，吸光值小于0.07abs的是石英的,，反之是玻璃的。
比色皿的使用
在使用比色皿時,兩個透光面要*平行,并垂直置于比色皿架中,以保證在測量時,入射光垂直于透光面,避免光的反射損失,保證光程固定,。
比色皿一般為長方體,，其底及兩側(cè)為磨毛玻璃，另兩面為光學(xué)玻璃制成的透光面采用熔融一體,、玻璃粉高溫?zé)Y(jié)和膠粘合而成,。所以使用時應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：
(1)拿取比色皿時，只能用手指接觸兩側(cè)的毛玻璃,，避免接觸光學(xué)面,，用力不可過大。同時注意輕拿輕放,，防止破損,。
(2)比色皿中不應(yīng)長期盛放含有腐蝕玻璃物質(zhì)的溶液。
(3)比色皿高溫后易爆裂,，因此不應(yīng)放在火焰或電爐上加熱或干燥箱內(nèi)烘烤,。
(4)當(dāng)比色皿里面被污染，應(yīng)用無水乙醇清洗,，并晾干或及時擦拭干凈,。
(5)比色皿的透光面不應(yīng)與硬物或臟物接觸。比色皿使用時請勿碰撞,。
(6)盛裝溶液時,，高度應(yīng)為比色皿的2/3處，光學(xué)面如有殘液可先用濾紙輕輕吸附,，然后再用鏡頭紙或絲綢順著同一方向擦拭,。
(7)比色皿中的液體，應(yīng)沿毛面傾斜,，慢慢倒掉,，不要將比色皿翻轉(zhuǎn)，直接口向下放在干凈的濾紙上吸干剩余液,，然后用蒸餾水沖洗比色皿內(nèi)部倒掉(操作同上)避免液體外流,，使第2次測量時不用擦拭比色皿,，不致因擦拭帶來的誤差。
(8)比色前將各個比色皿中裝入蒸餾水,，在比色波長下進(jìn)行比較,，誤差在±0.001吸光度以內(nèi)的比色皿選出4-8個進(jìn)行比色測定，可避免因比色皿差異造成測量誤差,。
(9)比色皿在使用后,，應(yīng)立即用水沖洗干凈。必要時可用1：1的鹽酸浸泡,，然后用水沖洗干凈,。
(10)在測量時如對比色皿有懷疑，可自行檢測,?？蓪⒉ㄩL選擇在實(shí)際使用的波長上，將一套比色皿都注入蒸餾水,，將其中一只的透射比調(diào)至95%(數(shù)顯儀器調(diào)置100%)處,，測量其它各只的透射比，凡透射比之差不大于0.5%即可配套使用,。
前人用過的經(jīng)驗(yàn)
1、使用前將比色皿在2%的硝酸溶液中浸泡24小時,，然后用水,，蒸餾水依次沖洗干凈，擦干,。
2,、比色前將各個比色皿中裝入蒸餾水，在比色波長下進(jìn)行比較,，誤差在±0.001吸光度以內(nèi)的比色皿選出4-8個進(jìn)行比色測定,，可避免因比色皿差異造成測量誤差。
3,、比色皿中的液體,，應(yīng)沿毛面傾斜，慢慢倒掉,，不要將比色皿翻轉(zhuǎn),，直接口向下放在干凈的濾紙上吸干剩余液，然后用蒸餾水沖洗比色皿內(nèi)部倒掉(操作同上)避免液體外流,，使第2次測量時不用擦拭比色皿,，不致因擦拭帶來的誤差。
比色皿管理維護(hù)
(1)按照實(shí)驗(yàn)中所使用的波長來選擇相應(yīng)的比色皿(玻璃或者石英),，紫外光區(qū)用石英比色皿,，而可見光區(qū)既可以使用玻璃比色皿，又可以使用石英比色皿?？紤]到價(jià)格問題,，可見光區(qū)選用玻璃比色皿。盡量做到專人專用或者專組專用,，用完清理后就交回,。這樣不易搞混不同的比色皿，也不影響比色皿間的配對,。
(2)盡量做到每個實(shí)驗(yàn)每臺紫外分光光度計(jì)有專用的配套比色皿,，不相互混用。如有交叉使用,，可記錄在冊,，下次恢復(fù)正常。
(3)用完即清洗,，清洗后在通風(fēng)陰涼處干燥,，等*干燥后放入相應(yīng)裝具中。放置時,，裝具保持清潔干燥,，比色皿應(yīng)秉承“光面朝上，毛面在兩側(cè)”的原則,，這樣便于抓取兩毛面拿出使用,，不易弄污光面。
關(guān)于比色皿配對與比色皿誤差測定的說明：
比色皿配對比較麻煩,，一般在分光光度法測定時采用比色皿誤差測定后進(jìn)行樣品的測定,。
1、比色皿配對
樣品溶液先配成吸收度在0.6～0.8之間的濃度測定,，然后用同批溶劑將溶液稀釋一倍,，再測吸收度。
從供試品溶液的配制起,，平行操作兩次,，并注明測定時的溫度。
同一臺儀器測定所得二份結(jié)果間的偏差應(yīng)不超過l%,。當(dāng)結(jié)果符合要求后,，對各臺儀器測得的平均值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，若相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不超過1.5%,，則以測得的平均值為相應(yīng)藥物的吸收系數(shù),。
現(xiàn)行的國家檢定規(guī)程中規(guī)定配對的兩只比色皿間差值不得超過±0.5%。因?yàn)樵诳梢姽鈪^(qū),，玻璃比色皿和石英比色皿都可以使用,，所以可利用每對比色皿間的透光率直接進(jìn)行比較,。
使用4對比色皿，在波長500nm下,，以空氣和純水為介質(zhì),，使用透光率T進(jìn)行測量，將每組比色皿中的一只透射率調(diào)為100%,，測量另外一只透光率,，凡透射率之差不大于5%(△T=0.005=0.5%)，即可配對使用,。
2,、比色皿誤差測定與樣品測定
（1）任意取用2只清潔比色皿,。
?。?）2只比色皿中加入相同的空白溶液。
?。?）以其中的任何一只比色皿為空白皿,，調(diào)節(jié)儀器的吸收度為0；
?。?）測定另一只比色皿的吸收度,，測得值為A0。用此比色皿測定樣品,，儀器的顯示值為A,，則樣品的真實(shí)測得值A(chǔ)樣=A-A0。
比色皿的洗滌
分光光度法中比色皿潔凈與否是影響測定準(zhǔn)確度的因素之一,。因此，比色皿必須保持清潔和無傷痕,，選擇正確的洗凈方法：玻璃和石英比色皿通?？捎美渌峄蚓凭⒈?、正己烷等有機(jī)溶劑清洗,。
應(yīng)按照測定的各種試劑，采用溶解中和的方法進(jìn)行清洗,，原則上是：一不能損壞比色皿的結(jié)構(gòu)和透光性能,；二能夠采用中和溶解的方法來達(dá)到比色皿干凈如初的效果。而分光光度計(jì)中比色皿潔凈與否,，則是影響測定準(zhǔn)確度的因素之一,。
1、比色皿清洗液
濃鹽酸：甲醇：水=1：4：3
如果比色皿被有機(jī)物污染,，宜用鹽酸—乙醇(1：2)混合液浸洗,，也可用相應(yīng)的有機(jī)溶劑如醇醚混合物浸泡洗滌,。如：油脂污染可用石油醚浸洗，鉻天青顯色劑污染可用硝酸(1：2)浸洗等,。比色皿不可用堿液洗滌,，也不能用硬布、毛刷刷洗,。
鉻酸洗液效果不錯,，但浸泡時間不宜過長，否則會腐蝕掉比色皿的粘接劑使其散架,。另外因?yàn)樗鼤诒壬蟊谏衔蕉霈F(xiàn)一層鉻化物的薄膜,，這種薄膜很難去除，鉻酸清洗后的比色皿在紫外區(qū)間基本不透光,，導(dǎo)致不能使用,。
稀釋的酸浸泡，效果不錯,，但酸濃度不能太高,。
也可用冷的或溫?zé)岬?40~50℃)陰離子表面活性劑的碳酸鈉溶液(2%)浸泡，可加熱10分鐘左右,。對于有色物質(zhì)的污染可用HCL(3mol/L)-乙醇(1+1)溶液洗滌,。
有色物質(zhì)污染的比色皿用鹽酸：乙醇(1:2)浸泡一段時間，顏色就去掉了,。
2,、清洗步驟
（1）比色皿用完后應(yīng)當(dāng)先用適當(dāng)溶劑沖洗,，注意里外都要洗到,。如果溶劑無毒的話，可以裝入一半溶劑后,，用手指按住比色皿的兩端,，用力搖晃，次數(shù)應(yīng)當(dāng)是不少于三次,。
?。?）然后用大量的自來水沖洗，這一步對水溶液和鹽溶液非常重要,。當(dāng)然如果所用溶劑不親水這步可以放棄,。
（3）最后再用去離子水清洗,注意里外都要洗到,，如果溶劑不親水的這一步也可放棄,。
（4）洗完后不要刻意的將比色皿擦干,，虛放在比色皿盒內(nèi),不用蓋上讓其自然揮干,。
3,、注意
清洗最好在用后立即進(jìn)行，否則樣品干后就更難處理,；
洗好的比色皿應(yīng)當(dāng)是透明,，沒有水跡的；
經(jīng)常使用的比色皿可以在洗凈后浸泡在純水或分析純乙醇里中保存,。
當(dāng)測定溶液是無機(jī)鹽溶液,，石英比色皿的一般清潔方法如下：
(1)用和無水乙醇的混合液(各50%)清洗。
(2)若太臟可用專用洗液清洗,。但時間要短(10分鐘之內(nèi)),，再用清水清洗干凈。注意選擇比色皿洗滌液的原則是去污效果好,，不損壞比色皿,，同時又不影響測定。
(3)不能用洗潔精之類的清潔劑,。以免影響測量,。
(4)比色皿不可用堿液洗滌，也不能用硬布,、毛刷刷洗,。
而當(dāng)遇到測定各種酸、堿,、有機(jī)溶液時,，如若測定溶液是酸，如果不干凈,，可用弱堿溶液洗,，若是測定溶液是堿，如果不干凈,，可用弱酸溶液洗,，要是測定溶液是有機(jī)物質(zhì)，如果不干凈,，可用有機(jī)溶劑，比如無水乙醇等溶液洗,。
值得注意的是,，分析實(shí)驗(yàn)常用的鉻酸洗液(洗液)不宜用于比色皿洗滌，這是因?yàn)閹谋壬笤谠撓匆褐锌赡軙a(chǎn)生熱量,，致使比色皿膠接面裂開而損壞,。同時經(jīng)洗液洗滌后的比色皿還可能殘存微量鉻(鉻在紫外區(qū)有吸收)，因此會影響實(shí)驗(yàn)的測定,。一般主張使用硝酸和過氧化氫(5:1)的混合溶液泡洗,，然后用清水沖洗干凈,。
最后，對一般方法難以洗凈的比色皿,，還可以采取以下兩種方法：
(1)先將比色皿浸入含有少量陰離子表面活性劑的碳酸鈉(20克/升)溶液泡洗,，經(jīng)水沖洗后，于過氧化氫和硝酸(5:1)混合溶液中再浸泡半小時,。
(2)在通風(fēng)櫥中用鹽酸,、水和甲醇(1:3:4)混合溶液泡洗，一般不超過10分鐘,。
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