目前,，不斷發(fā)展的DNA和蛋白質(zhì)相互作用的方法和技術(shù)已經(jīng)成為研究DNA復制,、重組、修復和轉(zhuǎn)錄的核心,。今天跟大家分享的是花樣百出,、拽酷炫的染色質(zhì)免疫共沉淀的方法！

染色質(zhì)免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,  CHIP)原理

值得注意的是,，它是目前*個研究體內(nèi) DNA與蛋白質(zhì)相互作用的方法,。在生理狀態(tài)下，把細胞內(nèi)的 DNA 與蛋白質(zhì)交聯(lián)在一起,，通過超聲或酶處理將染色質(zhì)切為小片段后,，利用抗原抗體的特異性識別反應(yīng),，將與目的蛋白相結(jié)合的 DNA 片段沉淀下來，以富集存在組蛋白修飾或者轉(zhuǎn)錄調(diào)控的 DNA 片段,，再通過多種下游檢測技術(shù)（定量 PCR,、基因芯片、測序等）來檢測此富集片段的 DNA 序列,。

染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)包括 3 個獨立的步驟,，即固定、沉淀和檢測,。

第 1 步為固定,，即在體內(nèi)用甲醛固定 DNA 和蛋白質(zhì)復合物，然后用化學（微球菌酶）或者機械（超聲波）的手段將其隨機切成一定長度的染色質(zhì)小片段（200～1000bp）,。

第 2 步為免疫沉淀,，即利用目的蛋白質(zhì)或者目的蛋白質(zhì)上標簽的特異性抗體，通過抗原和抗體反應(yīng)形成 DNA-蛋白質(zhì)－抗體復合體,，然后沉淀此復合體,，特異性地富集目的蛋白結(jié)合的 DNA 片段。

第 3 步為目的片段的純化與檢測,，即經(jīng)過熱處理解交聯(lián),，釋放共沉淀的 DNA；再將 DNA 片段純化后,，對沉淀的 DNA 樣品進行檢測,。

目前檢測方法主要有 3 種：

染色質(zhì)免疫共沉淀-qRT(ChIP-qRT)

第 1 種是比較沉淀的模版與陰性和陽性對照信號強度的相對精確的定量 PCR 方法。有關(guān)這個方法,，跟其他兩種相比,，只想送給愛學習愛動手的小伙伴四個字：成本較低！

染色質(zhì)免疫共沉淀芯片雜交(ChIP-chip)

ChIP 和 DNA 微陣列芯片技術(shù)的結(jié)合是一種高通量分析 DNA 和蛋白質(zhì)結(jié)合或者翻譯后染色質(zhì)/組蛋白修飾的方法,。具體方法是：將經(jīng)過染色質(zhì)免疫共沉淀的 DNA 樣品純化后進行 PCR 擴增,，然后用熒光素標記（如 Cy3）。對沒有經(jīng)過免疫沉淀反應(yīng)富集的 Input DNA 樣品也進行擴增,，并且用另一種熒光素標記（如 Cy5）,，作為結(jié)合背景的參照,。之后將這兩種 DNA 雜交于包括基因組序列的微陣列芯片上,，轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合的靶序列用每個點相應(yīng)的熒光強度來確定。

染色質(zhì)免疫共沉淀測序法(ChIP-seq)

在測序深度和范圍足夠的情況下, ChIP-seq 可以檢測到所有的組蛋白修飾所對應(yīng)的 DNA  結(jié)合位點,。ChIP-seq 首先通過染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)特異地富集目的蛋白結(jié)合的 DNA 片段, 并對其進行純化與文庫構(gòu)建,然后以 NGS 技術(shù)對富集到的 DNA 片段進行高通量測序,。

【NGS 技術(shù)主要是利用 DNA 新模板的合成或連接過程, 用高效平行的方式同時對 DNA 模板進行測序, 從而獲得大量的測序數(shù)據(jù), 即所謂的大規(guī)模平行測序?！?/p>

盡管染色質(zhì)免疫共沉淀看上去似乎很高大上,，但真正掌握其原理和方法之后其實也不難,。何況它的后續(xù)檢測并不都是 chip 和 seq 這些高消費的方法，也可以采用接地氣的 qRT-PCR,，小伙伴們可根據(jù)自己的情況作出選擇,。