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分子發(fā)光包括熒光,、磷光,、化學發(fā)光,、生物發(fā)光和散射光譜等,。基于化合物的熒光測量而建立起來的分析方法稱為分子熒光光譜法,。
由光源發(fā)出的光通過切光器使其變成斷續(xù)之光,，通過激發(fā)光單色器變成單色光，此光即為熒光物質(zhì)的激發(fā)光,。被測的熒光物質(zhì)在激發(fā)光照射下所發(fā)出的熒光,，經(jīng)過單色器變成單色熒光后照射于光電倍增管上，由其所發(fā)生的光電流經(jīng)過放大器放大輸至記錄儀,。一個激發(fā),，一個發(fā)射，采用雙單色器系統(tǒng),，可分別測量激發(fā)光譜和熒光光譜,。
熒光光譜儀主要包括光源、激發(fā)單色器,、樣品池,、熒光單色器及檢測器等主要部件。
1.光源
早期的熒光分光光度計,，配有能發(fā)生很窄汞線的低壓汞燈,。使用高壓汞燈，譜線被加寬,，而且也存在高強度的連續(xù)帶,。然而，一個完整的激發(fā)光譜的測定需一種能發(fā)射從可見到紫外范圍的較高強度的光輻射的燈,。氙弧燈能適于此條件,，因此，它是目前在熒光分光光度計中*泛使用的光源,。
2.單色器
單色器的作用是把光源發(fā)出的連續(xù)光譜分解成單色光,，并能準確方便地“取出”所需要的某一波長的光，它是光譜儀的心臟部分,。單色器主要由狹縫,、色散元件和透鏡系統(tǒng)組成，其中色散元件是關鍵部件,。色散元件是棱鏡和反射光柵或兩者的組合,，它能將連續(xù)光譜色散成為單色光,。
(1)棱鏡單色器
棱鏡單色器是利用不同波長的光在棱鏡內(nèi)折射率不同將復合光色散為單色光的。棱鏡色散作用的大小與棱鏡制作材料及幾何形狀有關,。常用的棱鏡用玻璃或石英制成,。可見分光光度計可以采用玻,，它適用于紫外,、可見整個光譜區(qū)。
(2)光柵單色器
光柵作為色散元件具有不少*的優(yōu)點,。光柵可定義為一系列等寬,、等距離的平行狹縫。光柵的色散原理是以光的衍射現(xiàn)象和干涉現(xiàn)象為基礎的,。常用的光柵單色器為反射光柵單色器,，它又分為平面反射光柵和凹面反射光柵兩種，其中常用的是平面反射光柵,。光柵單色器的分辨率比棱鏡單色器分辨率高(可達±0.2nm),，而且它可用的波長范圍也比棱鏡單色器寬，且入射光80%的能量在一級光譜中,。近年來,，光柵的刻制復制技術也在不斷地改進，其質(zhì)量也在不斷的提高,，因而其應用日益廣泛,。
(3)狹縫
狹縫是單色器的重要組成部分,，直接影響到分辨率,。狹縫寬度越小，單色性越好,，但光強度也隨之減少,。
3.樣品池
熒光儀用的樣品池需用低熒光的材料制成，通常用玻璃和石英材料,，形狀以方形和長方形為宜,。
4.檢測器
主要有硒光電池、光電管和光電倍增管等,。目前來說由于熒光的強度較弱,，一般以光電倍增管作檢測器。選擇光電倍增管要考慮響應波長,、靈敏度和噪聲水平等,。藍敏管對蛋白質(zhì)、核酸的測量適用,，而紅敏管則適用于熒光染料檢測,。
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