CRISPR/Cas系統(tǒng)是原核生物的一種天然免疫系統(tǒng),，存在于大多數(shù)細(xì)菌和古生菌中。原核生物在遭到病毒入侵后,，能夠把病毒DNA的一小段提取出來(lái)并存儲(chǔ)到自身基因組上的特定區(qū)域,， 我們把這個(gè)區(qū)域稱為CRISPR存儲(chǔ)空間。當(dāng)再次遇到病毒入侵時(shí),，原核生物能夠根據(jù)存儲(chǔ)的DNA片段識(shí)別病毒,，將病毒的DNA切斷而使之失效。目前應(yīng)用*泛的CRISPR/Cas系統(tǒng)是來(lái)源于釀膿鏈球菌 (Streptococcus pyogenes) 的CRISPR/Cas9系統(tǒng),。

       天然的CRISPR-Cas9系統(tǒng)由三部分組成：SpCas9 (以下簡(jiǎn)稱Cas9),、crRNA、tracrRNA,。為了方便實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)以及提高gRNA的穩(wěn)定性,，Jennifer Doudna和Emmanuelle Charpentier將crRNA和tracrRNA融合成一條RNA，并把其稱為sgRNA (single-guide RNA),，見下圖,。

       改造后的CRISPR/Cas9系統(tǒng)成為研究者做基因編輯的有利工具。Cas9蛋白要成功識(shí)別目標(biāo)序列必須滿足兩個(gè)條件：(1) sgRNA的5'端20 nt和靶DNA之間堿基配對(duì),；(2) 靶DNA的3'端有合適的PAM序列,。CRISPR/Cas9切割目標(biāo)DNA后產(chǎn)生DSB (雙鏈斷裂)，DSB是一切基于核酸內(nèi)切酶的基因編輯的基礎(chǔ),，CRISPR/Cas9因?yàn)橹恍枰淖僺gRNA的5'端序列即可重編程Cas9的序列特異性,，設(shè)計(jì)和操作十分方便。

CRISPR-Cas9技術(shù)優(yōu)勢(shì)

1. 效率高：可精確編輯基因組,，編輯效率高

2. 周期短：構(gòu)建和使用極為方便,，極大降低了實(shí)驗(yàn)難度，縮短實(shí)驗(yàn)周期

3. 廣譜性：無(wú)基因,、細(xì)胞及物種限制

4. 多重編輯能力：可實(shí)現(xiàn)多個(gè)靶位點(diǎn)同時(shí)進(jìn)行基因打靶

5. 功能豐富：可實(shí)現(xiàn)敲除,、插入,、抑制、激活等多種目的基因