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質(zhì)譜的常見問題

來源:蘇州邦鑫電子技術(shù)有限公司   2021年08月16日 09:54  

1,、質(zhì)譜不出峰的可能原因?

答:

1)進(jìn)樣系統(tǒng)與離子源沒連接或有漏液

2)六通閥漏液

3)霧化氣沒開

4)噴霧電壓沒有

5)離子進(jìn)入分析器的離子通道堵塞

6)噴霧毛細(xì)管堵塞

2,、如何根據(jù)樣品選擇離子源,?

答:可根據(jù)分子量的大小、極性,。APCI適合小分子,,極性小的化合物;ESI適合分析的分子量范圍較大,、分子要求帶有一定極性,。一般先考慮用ESI分析,如果極性實(shí)在太小,,才想到用APCI,。

3,、等度還是梯度洗脫如何選擇?

答:其實(shí)只做一兩個(gè)化合物,,是等度洗脫好,,速度快,但也并非越快越好,,特別在分析生物樣品時(shí),,考慮到基質(zhì)效應(yīng),保留因子控制在2-3左右較好,。梯度洗脫適合分析多個(gè)結(jié)構(gòu)不同的物質(zhì),,如化合物與代謝產(chǎn)物一同鑒定的時(shí)候,比如苷和苷元的一同測定,。另外很多做合成化學(xué)的分析實(shí)驗(yàn)室用的也是一通用的梯度洗脫方法,,一個(gè)方法搞定大部分樣品。一般來說對于組成簡單的樣品可以采用等度洗脫,,而對于那些復(fù)雜的樣品分離通常需要進(jìn)行梯度洗脫,。

4、氣質(zhì)和液質(zhì)系統(tǒng)對比

答:除了采用的分離手段不同(氣相和液相)外主要的區(qū)別在于真空系統(tǒng)和電離方式,。氣質(zhì)的真空系統(tǒng)比較簡單,,只要一個(gè)小的機(jī)械泵和一個(gè)分子渦輪泵就可以了。液質(zhì)的機(jī)械泵要比氣質(zhì)大,,需要兩個(gè)分子渦輪泵,。氣質(zhì)的電離方式有電子電離(EI)和化學(xué)電離(CI)。液質(zhì)的電離方式有電噴霧電離(ESI),、大氣壓化學(xué)電離(APCI)和大氣壓光電離(APPI),。

5、APCI和ESI的不同點(diǎn),?




答:

1)離子產(chǎn)生的方式不同,。APCI利用電暈放電離子化,氣相離子化,。ESI利用離子蒸發(fā),,液相離子化。

2)能被分析的化合物類型不同,。APCI適合弱極性,,小分子化合物,且具有一定的揮發(fā)性,;ESI 極性化合物和生物大分子,。

3)流速不同。ESI一般流速較小,,約0.001到0.25 mL/min,,APCI 相對較大,,約0.2到2 mL/min。

4)多電荷,。APCI不能生成一系列多電荷離子,,所以不適合分析大分子;ESI 能生成一系列多電荷離子,,特別適用于蛋白,,多肽類等生物分子。

6,、CID和CAD區(qū)別,?

答:CID(collision-induced dissociation),碰撞誘導(dǎo)解離,。通常在真空接口處調(diào)節(jié)電壓發(fā)生CID現(xiàn)象,,一般是去除溶劑,如果電壓增大,,也會產(chǎn)生碎片離子,。這是yi級質(zhì)譜的原理。CAD(collision-activated dissociation) 碰撞活化解離,。 做二級質(zhì)譜時(shí),,選擇的母離子進(jìn)入Q2后,碰撞活化產(chǎn)生子離子,,這個(gè)過程稱為 CAD,。以API3200譜儀為例,CID指的是Q0里面的誘導(dǎo)碰撞的氣體,,CAD指的是Q3里面的誘導(dǎo)碰撞氣體,。也就是說,在這里的CID&CAD都是指氮?dú)狻?/p>

7,、氮?dú)獍l(fā)生器該使用嗎,?

答:氮?dú)獍l(fā)生器的工作原理是分離空氣,電解膜的負(fù)極側(cè)發(fā)生氧化反應(yīng),,“吃掉”空氣中的氧化性氣體,,在正極側(cè)還原,,空氣流過電解池后就只剩下氮?dú)夂投栊詺怏w,。故國內(nèi)發(fā)生器的純度大多標(biāo)有“相對含氧量”。氮?dú)獾募兌群涂諝饬魉?、有效分解面的長度,、電解電勢的強(qiáng)弱都有關(guān)系。這種分離方法也決定了氮?dú)獾募兌炔豢赡茏龅暮芨?。加入電解質(zhì)的作用就是提高水的導(dǎo)電率,,使電化學(xué)反應(yīng)能順利進(jìn)行,。發(fā)生器對質(zhì)譜的影響有一點(diǎn)常常被忽略,就是發(fā)生器內(nèi)的開關(guān)電源工作時(shí)會對電網(wǎng)電壓造成一定的干擾(壓縮機(jī)的啟動和停止也會),。

8,、串聯(lián)質(zhì)譜如何定量?

答:串聯(lián)質(zhì)譜定量時(shí),,是以后面產(chǎn)生的碎片峰(子離子)定量,。但是這一子離子是由母離子在碰撞室產(chǎn)生的特征性碎片,所以用MRM定量靈敏度會比用SIM定量好很多,。建立方法的步驟是:用一定溶度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液(1-10 ug/mL)調(diào)諧化合物的yi級質(zhì)譜條件,,找到母離子的zui佳質(zhì)譜條件。然后對母離子進(jìn)行打碎,,優(yōu)化碰撞能量,,得到其特征性的子離子。zui后利用該質(zhì)譜條件和該母離子->子離子對進(jìn)行定量,。

9,、質(zhì)量偏差怎么辦?

答:質(zhì)譜的質(zhì)量數(shù)偏了,,說明你的儀器該校正了,,一般3個(gè)月就要校一次機(jī)。一般每個(gè)廠家都會隨機(jī)帶有校正液,。

10,、如何更換機(jī)械泵油?

答:一般3個(gè)月到半年更換一次泵油,,可同時(shí)停機(jī)對儀器進(jìn)行一次清洗,。更換泵油的時(shí)候,先開啟振氣閥5-10分鐘,,待將泵內(nèi)沉淀振起后,,關(guān)閉振氣閥,同時(shí)關(guān)閉電源,。打開泵下的泵油排放閥門,,放掉舊油。如果泵油已經(jīng)很臟,,則可取少許新油清洗泵后放掉再注入新油,。

11、產(chǎn)生碰裝室離子交互影響(Collision Cell Cross Talk)的原因及消除,?


答:多通道掃描(MRM)時(shí),,如果兩個(gè)離子掃描通道的碎片離子一樣(或類似如相差1-2分子量單位),前一個(gè)離子通道掃描結(jié)束后,碰裝室里的離子來不及清除,,影響下一個(gè)離子通道反應(yīng)的定量(如果色譜分離*則無此影響),。

可能的消除方法:

1)選擇特異的子離子(特別是在用穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)時(shí))

2)增加離子通道掃描反應(yīng)之間的時(shí)間間隔(如100 ms→300 ms)

3)可設(shè)置額外的“無用的離子掃描通道(dummy MRM)”

12、排除色譜柱流失問題的zui佳方法是什么,?

答:診斷色譜柱是否存在流失問題的方法是第yi次在方法條件下安裝色譜柱時(shí),,做一次空白色譜圖,然后將*近的運(yùn)行和空白運(yùn)行色譜圖對比,。如果在空白運(yùn)行中產(chǎn)生了很多峰,,則色譜柱性能改變,這可能是由于載氣中含有氧氣,,也可能是由于樣品殘留,。如果有 GC-MS,則低極性色譜柱的典型流失離子(例如 DB/HP-1或5)質(zhì)/荷比m/z 將為 207,、73,、281、355 等,,大多數(shù)為環(huán)硅氧烷,。

13、譜圖為什么只有溶劑峰,?

答:可能有以下原因

1)進(jìn)樣針損壞

2)載氣流速太低

3)樣品濃度太低

4)樣品被柱或進(jìn)樣器襯套吸附

14,、質(zhì)譜基線高是什么原因,?

答:質(zhì)譜的基線其實(shí)跟液相的紫外檢測器和熒光檢測器一樣,,基線高的原因不外乎內(nèi)部和外部的原因,。

1)選擇的流動相在質(zhì)譜的響應(yīng)比較高,比如水相比較多的時(shí)候,,噪音比較大些,;還有如果鹽含量比較大的時(shí)候,噪音更大些,。

2)檢測器的靈敏度越高的時(shí)候,,噪音應(yīng)該越高。如果質(zhì)譜的污染比較嚴(yán)重時(shí),,基線肯定比較高,。比如離子阱檢測器,用得久了,,阱中的離子就會增多,,一方面降低了質(zhì)譜的靈敏度,另一方面增加了基線噪音,。

3)質(zhì)譜的基線很多時(shí)候還跟你選擇的離子寬度有關(guān),。比如作選擇離子掃描的時(shí)候,,基線就低些,。作選擇反應(yīng)掃描的時(shí)候,,離子寬度不要選得太寬,太寬噪音就高些,。

4)多級質(zhì)譜一般做二級或三級質(zhì)譜,,基線噪音就低很多。



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