HPLC分析,,尤其是正相色譜的分析受溫度的影響特別大,,反相分析一般受影響不大,,有些物質(zhì)的分析必須在固定的溫度下進(jìn)行,。之前用鈣柱做過葡萄糖的分析,,要求必須柱溫85度,。
而在色譜定性方法中,,柱溫變化對定性結(jié)果的影響如下:
①當(dāng)采用絕對保留值定性時(shí),,其他色譜條件不變,,柱溫變化時(shí),保留時(shí)間就會(huì)發(fā)生變化,,這樣就直接影響定性結(jié)果判斷,。
②當(dāng)采用相對保留值α定性時(shí),,α只是柱溫和固定液的函數(shù),,只與待測組分的熱力學(xué)性質(zhì)有關(guān),消除了外界因素的影響,,因此跟柱溫變化關(guān)系不大,,但是柱溫變化影響判斷結(jié)果。
?、郛?dāng)采用保留指數(shù)定性時(shí),,恒溫分析,保留指數(shù)與保留時(shí)間有關(guān),,而柱溫影響保留時(shí)間變化,;程序升溫分析,除了保留時(shí)間,,保留指數(shù)還與保留溫度有關(guān),。因此,這種定性方法易受柱溫變化影響,。
?、墚?dāng)采用純樣疊加法定性時(shí),已知混合物中含某組分,,將該組分的純樣加入,,觀察加入前后的響應(yīng)信號(hào)變化。柱溫變化,,保留時(shí)間變化,,但是加入前后的樣品影響信號(hào)變化是一致的,因此柱溫變化不影響采用這種方法定性的結(jié)果,。
而在定量計(jì)算時(shí),,經(jīng)常要用到校正因子,如重量校正因子,,和組分的質(zhì)量以及響應(yīng)信號(hào)有關(guān),。柱溫變化,峰高變化,峰面積不變,,因此,,在柱溫變化不影響峰形正常的前提下,以峰高為響應(yīng)信號(hào)的重量校正因子,,受柱溫影響,,而以峰面積為響應(yīng)信號(hào)的重量校正因子將不受影響。常見定量方法中,,在柱溫波動(dòng)不影響出峰效果的前提下,,對定量結(jié)果的影響如下:
①采用歸一化法時(shí),,定量時(shí)需要各組分的校正因子,,當(dāng)以峰面積為響應(yīng)信號(hào)時(shí),定量結(jié)果不受影響,,以峰高為響應(yīng)信號(hào)則受影響,。
②采用內(nèi)標(biāo)法時(shí),,需要計(jì)算定量校正因子,,影響規(guī)律和①同。
?、鄄捎猛鈽?biāo)法時(shí),,即標(biāo)準(zhǔn)曲線法,當(dāng)以峰面積為響應(yīng)信號(hào)時(shí),,不受影響,,但是當(dāng)以峰高為響應(yīng)信號(hào)時(shí),影響很大,。
總之,,柱溫變化可能會(huì)導(dǎo)致定性、定量分析結(jié)果的變化,。
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